[发明专利]分步酶法提取金耳多糖的新工艺

权利要求书

1.一种从金耳子实体中提取生物活性多糖的新工艺，其特征为在提取金耳多糖过程中，将金耳子实体干品粉碎后浸泡于水中，并采用果胶酶、纤维素酶、中性蛋白酶分步对金耳子实体的浸提物进行酶解处理，经试验确定了各种酶的最适用量、酶解时间、酶解温度和pH值，使酶活力达到最高水平，子实体细胞内外的金耳多糖充分释放而溶入水中，并与其它的非多糖类物质大分子相脱离，然后通过醇沉的方式沉淀分离获得多糖。利用该工艺既能在温和的生产条件下高效地提取到高纯度的金耳多糖，又能完整地保护多糖的分子结构和构像，最大程度地维持其生物活性。分析结果表明：与传统的水浸提法相比，分步酶法提取金耳多糖的多糖提取率从7.8％提高到了14.3％，多糖中的蛋白质含量由13.3％降低到了1.6％，产品的产量和质量都有了大幅度提高。

2.根据权利要求书1所述的工艺方法，将干燥的金耳子实体在粉碎机中粉碎至60目颗粒，称取粉碎后的金耳子实体，按子实体∶蒸馏水＝1∶20的比例(质量比)加入蒸馏水，于80℃恒温水浴，充分搅拌，浸泡1.0小时。

3.根据权利要求书1所述的工艺方法，将上述金耳浸泡物的温度冷却至45℃，调pH值至4.5，加入相当于金耳子实体干品1.2％质量的果胶酶，酶解时间1.5小时。

4.根据权利要求书1所述的工艺方法，在完成果胶酶酶解过程后，将金耳浸泡物的温度冷却至38℃，调pH值至3.5，加入相当于金耳子实体干品0.5％质量的纤维素酶，酶解时间3.0小时。

5.根据权利要求书1所述的工艺方法，在完成纤维素酶解过程后，将金耳浸泡物温度升至50℃，调pH值至4.0，加入相当于金耳子实体干品质量1.0％的中性蛋白酶，酶解时间2.0小时。

6.根据权利要求书1所述的工艺方法，将上述完成分步酶解后的浸泡物加热到95℃，对残留酶进行灭活，同时补充蒸馏水，使子实体∶蒸馏水＝1∶30(质量比)，充分搅拌浸泡，维持2.0小时。

7.根据权利要求书1所述的工艺方法，将浸泡物用8层纱布初次过滤，将滤液的体积浓缩5倍，备用。滤渣用10倍质量的蒸馏水重新浸泡1小时，用8层纱布再次过滤，将滤液体积浓缩5倍，滤渣弃去。将初次滤液和第二次滤液合并。合并后的滤液体积再次浓缩2倍，经滤纸再次过滤，获得澄清透明的金耳多糖浓缩溶液。

8.根据权利要求书1所述的工艺方法，在多糖浓缩溶液中加入3倍体积的95％乙醇，充分搅拌，产生大量絮状多糖沉淀，用离心机2000rpm离心10分钟，分离出金耳多糖沉淀，并分别用分析纯甲醚和乙醇交替冲洗1次，真空干燥，获金耳多糖成品。