[发明专利]高效诱导培养百合小鳞茎的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种在试管内高效生产百合籽球的方法，属于植物种球繁育技术领域。

背景技术

百合是百合科(Liliaceae)百合属(Lilium)多年生草本鳞茎植物，是世界著名的观赏花卉，被广泛应用于花卉装饰。近十年来随着我国人民生活水平的提高，大量优良的观赏栽培品种陆续从国外引入我国，成为我国花卉市场中的高档切花种类。百合繁殖系数不高是百合种球生产中一个突出的问题。我国大面积栽培的切花百合，种球绝大部分由荷兰进口。种球的质量和数量已成为我国百合切花生产的重要限制因素。

百合主要以小鳞茎进行分株或鳞片扦插繁殖，通常1株百合每年只能得到3-200个小鳞茎，繁殖速度及数量非常有限。组织培养是快速繁殖种球较为有效的方法。在百合组培种球种苗的培养过程中，已有的报道均采用组培苗增殖或在试管内直接生成小籽球的培养方式，其增殖率在10万粒/年以下，但仍不能满足市场需求量。

发明内容

本发明的目的在于提供一种繁殖速度快，数量多的高效诱导培养百合小鳞茎的方法，以满足市场需求。

本发明通过下列技术方案实现：一种高效诱导培养百合小鳞茎的方法，包括无菌外植体的获取及鳞片剥取，其特征在于经过下列步骤进行培养：

A、胚状体诱导培养：在无菌条件下，将灭菌后的鳞片切块接种到单位为mg/L的下列诱导培养基中，在温度为23±3℃，光照时间为10-12h/d，光照强度为1500-2000Lx的条件下培养15-20d，获得胚状体愈伤组织：

MS基本培养液

6-苄基氨基嘌呤6-BA    2.0-4.0

萘乙酸NAA             0.1-0.5

蔗糖                  30000

琼脂                  5500

pH                    5.8；

B、胚状体组织增殖培养：在无菌条件下，将步骤A获得的胚状体愈伤组织切片后转入单位为mg/L的下列增殖培养基中，在温度为23±3℃，光照时间为10-12h/d，光照强度为1500-2000Lx的条件下培养15-20d，使胚状体组织分化成大量胚芽：

MS基本培养液

6-苄基氨基嘌呤6-BA     1.0-2.0

萘乙酸NAA              0.1-0.5

蔗糖                   30000

琼脂                   5500

pH                     5.8；

C、籽球分化培养：将步骤B生成的丛生胚芽分割成片状，转入单位为mg/L的下列培养基中进行籽球分化培养，其培养条件为：温度18-22℃，全黑暗遮光，培养时间25-35d，即在切块及周围直接生成小籽球：

MS基本培养液

萘乙酸NAA           0-0.5

蔗糖                60000

琼脂                5500

活性炭              300

pH                  5.5-5.8；

D、籽球膨大培养：将步骤C生成的小籽球分切成单个，剥离外部不规则的小鳞片后转入单位为mg/L的下列培养基中进行生根及膨大培养，培养条件：温度18-22℃，全黑暗遮光，培养时间15-20d，籽球长出根系：

1/2MS基本培养液

萘乙酸NAA             1.0-2.0

蔗糖                  60000-90000

琼脂                  5500

活性炭                300

pH                    5.5-5.8；

E、籽球出瓶及包装：将合格籽球从培养基中取出后放入装清水的盆中清洗，滤干水分后立即放入塑料筛中，采用农用链霉素∶百菌清＝1∶1的比例按混合800倍液浸泡20-30min，滤干消毒液后用打孔的塑料袋包装，及时放置到冷库中贮藏。