[发明专利]高效诱导培养百合小鳞茎的方法

权利要求书

1.一种高效诱导培养百合小鳞茎的方法，包括无菌外植体的获取及鳞片剥取，其特征在于经过下列步骤进行培养：

A、胚状体诱导培养：在无菌条件下，将灭菌后的鳞片切块接种到单位为mg/L的下列诱导培养基中，在温度为23±3℃，光照时间为10-12h/d，光照强度为1500-2000Lx的条件下培养15-20d，获得胚状体愈伤组织：

MS基本培养液

6-苄基氨基嘌呤6-BA                    2.0-4.0

萘乙酸NAA                             0.1-0.5

蔗糖                                  30000

琼脂                                  5500

pH                                    5.8；

B、胚状体组织增殖培养：在无菌条件下，将步骤A获得的胚状体愈伤组织切片后转入单位为mg/L的下列增殖培养基中，在温度为23±3℃，光照时间为10-12h/d，光照强度为1500-2000Lx的条件下培养15-20d，使胚状体组织分化成大量胚芽：

MS基本培养液

6-苄基氨基嘌呤6-BA                    1.0-2.0

萘乙酸NAA                             0.1-0.5

蔗糖                                  30000

琼脂                                  5500

pH                                    5.8；

C、籽球分化培养：将步骤B生成的丛生胚芽分割成片状，转入单位为mg/L的下列培养基中进行籽球分化培养，其培养条件为：温度18-22℃，全黑暗遮光，培养时间25-35d，即在切块及周围直接生成小籽球：

MS基本培养液

萘乙酸NAA                        0.1

蔗糖                            60000

琼脂                            5500

活性炭                          300

pH                              5.5-5.8；

D、籽球膨大培养：将步骤C生成的小籽球分切成单个，剥离外部不规则的小鳞片后转入单位为mg/L的下列培养基中进行生根及膨大培养，培养条件：温度18-22℃，全黑暗遮光，培养时间15-20d，籽球长出根系：

1/2MS基本培养液

萘乙酸NAA                       1.0-2.0

蔗糖                            60000-90000

琼脂                            5500

活性炭                          300

pH                              5.5-5.8；

E、籽球出瓶及包装：将合格籽球从培养基中取出后放入装清水的盆中清洗，滤干水分后立即放入塑料筛中，采用农用链霉素∶百菌清＝1∶1的比例按混合800倍液浸泡20-30min，滤干消毒液后用打孔的塑料袋包装，及时放置到冷库中贮藏。