[发明专利]一种分子量内标的制备方法及用该方法制备的分子量内标

权利要求书

1.一种分子量内标的制备方法，以pUC18质粒为模板，固定上游引物5′GCGAAACCCGACAGGACTA3′，选取相应距离设计下游引物，扩增得到多个核苷酸片段。

2.根据权利要求1所述的分子量内标的制备方法，所述下游引物分别为

70R：5′ACAGGAGAGCGCACGAGG  3′；

80R：5′CAGGGTCGGAACAGGAGAG  3′；

100R：5′GACAGGTATCCGGTAAGCGG  3′；

120R：5′TTCCCGAAGGGAGAAAGGC  3′；

140R：5′GCTATGAGAAAGCGCCACG  3′；

160R：5′CTGAGATACCTACAGCGTGAGC  3′；

180R：5′AGCGAACGACCTACACCGA  3′；

200R：5′GTGCACACAGCCCAGCTTG  3′；

240R：5′TACCGGATAAGGCGCAGC  3′；

280R：5′GATAAGTCGTGTCTTACCGGGT  3′；

320R：5′CGCTCTGCTAATCCTGTTACCA  3′；

360R：5′GCCACCACTTCAAGAACTCTGT  3′；

400R：5′CAGATACCAAATACTGTTCTTCTAGT  3′；

450R：5′ATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCC  3′；

490R：5′ACAAAAAAACCACCGCTACCA  3′；

500R：5′CTGCTTGCAAACAAAAAAACC  3′；

分别扩增得到70bp，80bp，100bp，120bp，140bp，160bp，180bp，200bp，240bp，280bp，320bp，360bp，400bp，450bp，490bp，500bp片段。

3.根据权利要求2所述的分子量内标的制备方法，所述扩增的反应条件为：94℃ 2min；30cycles：94℃ 20sec，58℃ 40sec，72℃ 40sec；70℃ 10min。

4.根据权利要求1所述的分子量内标的制备方法，所述上游引物带有荧光标记物。

5.根据权利要求4所述的分子量内标的制备方法，所述荧光标记物为ROX，FAM，HEX，JOE，TMR，LIZ或Cy5。

6.权利要求1至5任一所述的分子量内标的制备方法制备得到的分子量内标。