[发明专利]叶酸免疫胶体金检测试纸条及其制备方法

权利要求书

1. 一种检测叶酸的免疫胶体金层析试纸条，其特征在于：所述试纸条是由底板(1)上的依次接合吸水垫(2)、特定包被的硝酸纤维膜(NC膜)(3)、NC膜上有捕获线(4)和质控线(5)，涂覆胶体金标记特异抗体的玻璃纤维胶体金结合垫(6)、样品垫(7)而组成的条形物；所述玻璃纤维胶体金结合垫(6)涂覆胶体金标记特异抗体为叶酸单克隆抗体。

2. 根据权利要求1所述试纸条，其特征在于：所述吸水垫(2)为一种滤纸，包括吸水纸和滤油纸；吸水垫贴在底板的末端。

3. 根据权利要求1所述试纸条，其特征在于：所述特定包被的NC膜(3)由一层滤膜和胶膜组成，NC膜上涂叶酸-牛血清白蛋白抗原和兔抗小鼠二抗；NC膜贴在底板的中间，两端分别与结合垫和吸水垫连接。

4. 根据权利要求1所述试纸条，其特征在于：所述结合垫(6)为玻璃纤维纸，用含聚乙烯醇的硼酸缓冲液浸泡处理后，37℃干燥过夜，喷涂上胶体金标记的叶酸单克隆抗体，再冷冻干燥，叶酸单克隆抗体是针对叶酸抗原表位，结合垫上与样品垫衔接，下与NC膜衔接。

5. 根据权利要求1所述试纸条，其特征在于：所述样品垫(7)为玻璃纤维纸，用含聚乙烯醇的硼酸缓冲液浸泡，缓冲液PH为7.2，浸泡处理后，37℃干燥过夜；样品垫位于结合垫上。

6. 一种权利要求1所述的试纸条在制备叶酸诊断试纸条中的应用，其特征在于：诊断试纸条还包括标识条，此标识条为两个带有标识的不干胶纸，分别粘贴在试纸条的两端，带有箭头端是贴在样品垫和结合垫上，由此端浸入待测样品，靠另一端的吸水垫的吸水作用，使样品经过NC膜。

7. 一种权利要求1所述的试纸条在制备叶酸测试卡中的应用，其特征在于：测试卡还包括塑料卡，此塑料卡是一个用塑料特制的卡，由上下2片组成，上下片可嵌合在一起，下片主要有一个放试纸条的槽和与上片结合的卡齿，上片主要包括一个检测孔、一个样品孔以及与下片结合的卡齿，检测孔旁边分别印有T和C字样，T表示捕获线的位置，C表示质控线的位置，检测孔是观察结果的窗口，样品孔是滴加样品的位置。

8. 一种检测叶酸的免疫胶体金层析试纸条的制备方法，包括如下步骤：

1)叶酸-BSA抗原制备：

将叶酸、BSA和偶联剂于反应液中室温避光反应，凝胶层析分离偶联物，透析，浓缩，制成免疫抗原和包被抗原；

2)胶体金的制备：

a量取一定量的洗液于洁净的烧瓶中，煮沸5分钟，再换一次酸洗液，煮沸5分钟；

b量取一定量的超纯水于该烧瓶中，煮沸5分钟，再换一次超纯水，煮沸5分钟；

c弃去超纯水，称取适量三蒸水于该烧瓶中，加热至沸腾，加入适量1％氯金酸，加热至沸腾；

d搅拌下加入6～10毫升2％柠檬酸三钠，沸腾5-10分钟；

3)胶体金探针标记：将叶酸单克隆抗体用NaCl透析过夜，离心除去蛋白沉淀；取胶体金100毫升，调节胶体金溶液PH值9.0，搅拌加入1毫升稀释的叶酸单克隆抗体，再缓慢加入1毫升10％BSA充分混匀，搅拌，离心弃上清，加入工作液溶解；

4)制备检测叶酸的胶体金免疫试纸条：先将玻璃纤维膜放入质量百分比浓度为1％的牛血清白蛋白、质量百分比浓度为1％的TX-100的磷酸盐缓冲液中封闭30min，37℃烘干，再将玻璃纤维膜浸泡于标记叶酸单克隆抗体的胶体金探针中，真空干燥，将制备好的试剂条板上NC膜用喷膜机分别喷上捕获抗原(叶酸-BSA偶联抗原)和质控抗体(兔抗Balb/c球蛋白抗体)，喷完后37℃干燥过夜；将吸水垫、已包被的硝酸纤维膜、玻璃纤维胶体金结合垫、样品垫依次粘于底板上，裁成细条，即成一种检测叶酸的胶体金免疫试纸条。

9. 根据权利要求8所述制备方法，其特征在于：2)步中所述三蒸水为200毫升，所述氯金酸为10毫升，所述柠檬酸三钠为7.5毫升。

10. 根据权利要求8所述制备方法，其特征在于：3)步中所述加入10％BSA后，再加入1毫升10％PEG20000充分混匀，离心弃上清，加入工作液溶解。