[发明专利]叶酸免疫胶体金检测试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用胶体金免疫层析技术检测血液中叶酸水平的试纸条及其制备方法，属于医学检验领域。

背景技术

叶酸是一组化学结构相似，生化特性相近的化合物统称，是由喋啶、对氨基苯甲酸和1个或多个谷氨酸结合而成。叶酸为机体细胞生长和繁殖所必须的物质，能够帮助蛋白质代谢，与维生素B12共同促进红细胞的生成和成熟，同时还是制造红血球不可缺少的物质。在体内叶酸以四氢叶酸的形式起作用，四氢叶酸在体内参与嘌呤核酸和嘧啶核苷酸的合成和转化；在制造核酸(核糖核酸、脱氧核糖核酸)上扮演重要的角色；是人体在利用糖分和氨基酸时的必要物质。叶酸对于孕妇尤其重要，能够满足新生儿的营养需求，减少新生儿的神经管畸形的发生，并促进乳汁分泌。此外，人们还发现叶酸可引发癌细胞凋亡，同时通过影响癌细胞的基因表达发挥抗肿瘤作用。对婴幼儿神经细胞与脑细胞发育有促进作用，还可作为精神分裂症病人的辅助治疗，以及用于治疗慢性萎缩性胃炎、抑制支气管鳞状转化以及防治因高同型半胱氨酸血症引起的冠状动脉硬化症、心肌损伤与心肌梗塞等。摄取不足、吸收障碍、需求量增加、利用障碍，如妊娠期、巨幼细胞贫血、肝硬化、各类急慢性白血病、慢性溶血等原因均可引起血清叶酸减少。血清叶酸缺乏会导致巨幼红细胞贫血；妇女孕前或妊娠早期缺乏叶酸是神经管畸形发生的重要病因之一；同时，叶酸与同型半胱氨酸代谢关系密切，叶酸缺乏可使同型半胱氨酸向蛋氨酸转化出现障碍，进而导致同型半胱氨酸血症，从而导致心血管发病风险，故检测叶酸水平对预防心血管疾病的发生亦具有重要意义。

叶酸检测目前主要采用的技术方法有：高效液相(HPLC)方法、荧光偏振免疫检测(FPLA)方法、酶联免疫技术(ELISA)、和化学发光法等。高效液相(HPLC)方法操作比较复杂，试验耗时比较长，且试验数据变异比较大。荧光偏振免疫检测(FPLA)方法检测费时，须配备专用全自动荧光分析仪器，设备昂贵，不宜普及。酶联免疫技术(ELISA)大部分操作为手工操作，比较耗时，定量检测需配备仪器，必须有专门的实验室。化学发光法，检测时间在2h以上，且价格昂贵。以上方法均不适于在基层检验场所应用。免疫胶体金层析技术操作简单、快速、敏感和特异性好，用于叶酸的快速检测，有益于叶酸基层医疗机构检测的普及，此项技术虽然是一种较为成熟的技术，但对不同的抗原抗体系统的应用有差异，包括原料来源，试剂配制，生产工艺等都不同，需进行新的设计和试验。目前国内外均未查到有用于检测叶酸的免疫胶体金层析快速诊断试纸条，包括文献报道和发明专利。

发明内容

为克服现有叶酸检测技术的不足，本发明提供一种检测叶酸的试纸条。本发明根据胶体金免疫层析技术特点和叶酸抗原抗体系统特点，设计新的原材料，试剂和工艺流程，应用本发明提供的试纸条检测叶酸水平，具有简单，快速，灵敏和特异性好等特点，15分钟以内出结果，并且价格低，适用于基层检测和临床初筛。

本发明所述试纸条是由底板上依次接合吸水垫、特定包被的硝酸纤维膜、涂覆胶体金标记特异抗体的玻璃纤维胶体金结合垫、样品垫而组成的条形物；所述玻璃纤维胶体金结合垫涂覆胶体金标记特异抗体为叶酸单克隆抗体。检测样品经过样品垫和结合垫再经层析作用在NC膜上出现捕获线和质控线，用肉眼判断结果。在NC膜上仅仅出现一条质控线，结果为阳性，在NC膜上同时出现捕获线和质控线，结果为阴性，不出现线条表示试纸条或测试卡失效。15分钟内出结果。

本发明所述试纸条吸水垫为一种滤纸，包括吸水纸和滤油纸，切成要求大小直接使用。贴在底板的末端，起吸水作用。

本发明所述试纸条上特定包被的NC膜是一种专门用于胶体金试纸条的材料，由一层滤膜和胶膜组成，成卷筒装，NC膜上喷2条线，分别为捕获线和质控线，捕获线喷涂的是叶酸-牛血清白蛋白抗原，质控线喷涂的是兔抗小鼠二抗；NC膜贴在底板的中间，两端分别与结合垫和吸水垫连接。

本发明所述试纸条上结合垫为玻璃纤维纸，用含聚乙烯醇的硼酸缓冲液浸泡处理后，37℃干燥过夜，喷涂上胶体金标记的叶酸单克隆抗体，再冷冻干燥，叶酸单克隆抗体是针对叶酸抗原表位，结合垫上与样品垫衔接，下与NC膜衔接。

本发明所述试纸条样品垫为玻璃纤维纸，用含聚乙烯醇的硼酸缓冲液浸泡处理，缓冲液PH为7.2，浸泡处理后，37℃干燥过夜，在试剂条中起过滤样品的作用，位于结合垫上，贴在底板上。

本发明还提供上述试纸条在制备HCY诊断试纸条中的应用，诊断试纸条还包括标识条，此标识条为两个带有标识的不干胶纸，分别粘贴在试纸条的两端，带有箭头端是贴在样品垫和结合垫上，由此端浸入待测样品，靠另一端的吸水垫的吸水作用，使样品经过NC膜。