[发明专利]卵巢细胞微囊

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种卵巢细胞微囊。

背景技术

卵巢是女性重要的生殖内分泌器官，有明显的年龄性变化。卵巢功能的衰退始于30岁，并于绝经期开始，卵巢功能迅速下降，雌激素分泌锐减(绝经后雌激素水平可比高峰期下降90％)，从而导致机体出现一系列器官功能紊乱现象，特别是与雌激素关系密切的心血管、骨骼、大脑和皮肤等，在绝经后容易发生疾病。随着人类寿命的延长和生活水平的提高，人类生存的目标不仅是“活着”，而且要“活好”。因此临床上使用激素替代疗法纠正因卵巢功能衰退(卵巢早衰，更年期)造成的机体功能紊乱。激素替代疗法能有效地预防因性激素分泌不足而引发的一些疾病(如骨质疏松、女性绝经后综合征等)，但同时发现女性雌激素水平由于受下丘脑-腺垂体的调节，不仅有着明显的周期性变化，而且还有明显的个体差异，激素替代疗法很难做到个体化。由于外源性雌激素在体内呈非生理性释放，可产生一些较为严重的副反应，如增加心脑血管疾病的死亡率和乳腺癌、静脉血栓等的发生率，因此，近年来对应用激素替代疗法预防绝经前后妇女慢性病的方法出现了争议。目前只有那些有绝经期症状和存在有与绝经相关的生活质量逆向改变的妇女，首选激素替代治疗，并且使用最低的有效剂量和短疗程治疗。随着器官移植技术的进一步成熟和完善，人们希望当机体性腺功能衰退时，进行异体性腺移植，将能还机体一个置身于自体神经内分泌调控之下，适合于宿主本身内分泌水平的有功能的器官。卵巢移植的目的是为卵巢早衰、双侧卵巢切除或绝经期妇女，提供一种内源性雌性激素。目前主要有卵巢自体移植、胚胎卵巢移植、同种异体移植。卵巢自体移植由于供体卵巢来源充足，无免疫排斥，手术操作简单，临床上主要用于卵巢原位发生病变需放化疗的患者(卵巢组织冷冻用于自体异位移植已成为可能)。胚胎卵巢细胞有较强的分化能力，被移入异体内可生长发育至成熟，并有内分泌功能，而且还能接受上级器官-垂体激素的调控，虽然目前胚胎卵巢被认为是比较理想的供体，但仍存在排异反应和来源问题。同种异体移植可为供体来源提供又一渠道，但面临的最大问题是免疫排斥反应。

微囊技术起源于20世纪60年代，是组织工程的一个分支，是将外源性的细胞或组织包埋在半透性人工膜中进行体内移植，目的是通过微囊的免疫隔离作用，提高移植物在异体的存活率。采用微囊包埋技术进行细胞固定和移植要求所制备的微囊需具有透过性，以保证囊内细胞分泌产生的特定因子可通过囊膜进入细胞外间隙。APA生物微胶囊被认为是较好的微囊制备材料，海藻酸钠(ALG)是由海藻中提出的聚阴离子多糖，在多价阳离子如Ca²⁺存在时形成凝胶。多聚赖氨酸(PLL)是聚阳离子大分子，与ALG可形成大分子复合物。目前已有胰岛细胞、多巴胺细胞、甲状旁腺等分泌含氮类激素细胞的微囊包裹及移植实验取得可喜研究进展的报道，提示内分泌腺是微囊技术的适应组织，也证实微囊技术具有广泛的应用前景。但雌激素的合成与分泌具有特殊性与复杂性，即需要卵泡膜细胞和卵泡颗粒细胞共同协作完成，并受下丘脑-垂体-性腺轴的调控，呈周期性分泌。体外培养卵巢细胞是否能持续性分泌雌激素，应用微囊技术将卵巢细胞微囊化后是否能持续性分泌雌激素，以及移植入小鼠腹腔后是否能持续性分泌雌激素，同时是否能有效地预防机体各个生命必需器官的衰退(这是当前的激素替代疗法无法解决的难题)，国内外尚未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种卵巢细胞微囊，实现补充体内性激素个性化；

本发明的另一个目的在于提供上述卵巢细胞微囊的制备方法及应用。

本发明的卵巢细胞微囊是应用海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)包裹卵巢细胞，制备成内含卵巢细胞的微囊。微囊中的卵巢细胞是卵巢组织去除卵细胞外的其余细胞，包括具有内分泌功能的卵巢颗粒细胞和卵泡膜细胞；未分化的卵巢内间充质细胞和结缔组织细胞。

APA卵巢细胞微囊为圆球型，表面光滑透明。微囊膜属于生物半透膜，能阻止大分子物质进入膜内，小分子物质、细胞因子、性激素、O₂、CO₂等可以自由通过微囊膜。

上述微囊内的卵巢细胞是取卵巢组织，剪碎后制备成细胞悬液，经体外增殖培养获得。卵细胞在培养过程中自然去除。

本发明的卵巢细胞微囊的制备方法包括如下步骤：

1)将经体外增殖培养后的卵巢细胞消化后制成细胞悬液；

2)将步骤1)细胞悬液与1.5％(质量g/体积L)海藻酸钠混合制成终密度为2×10⁶个/ml细胞悬液。