[发明专利]卵巢细胞微囊

权利要求书

1.一种卵巢细胞微囊，其特征在于，所述微囊是应用海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠包裹卵巢细胞制备成的微囊。

2.如权利要求1所述的卵巢细胞微囊，其中所述卵巢细胞包括卵巢颗粒细胞、卵泡膜细胞、间充质细胞和结缔组织细胞。

3.如权利要求1或2所述的卵巢细胞微囊，其中所述卵巢细胞通过如下方法获得：取卵巢组织，制成细胞悬液，经体外增殖培养后获得。

4.如权利要求3所述的卵巢细胞微囊，其中所述的卵巢细胞通过如下方法获得：取卵巢组织，剪碎后，加入消化液置于37℃恒温水浴摇床消化，30min后加入含10％FBS培养液终止消化，179g离心10min，去除上清液，以无血清培养液清洗后制成细胞悬液，经60目细胞筛过滤，以10⁶的密度接种于培养瓶内，加入D/F12全培养液，置于37℃5％CO₂培养箱培养，待细胞长满融合后，以0.25％胰蛋白酶与0.02％EDTA 1∶1混合消化液消化，将消化后的细胞重新制备成细胞悬液，进行继代增殖培养。

5.一种制备权利要求1～4所述卵巢细胞微囊的方法，其包括如下步骤：

1)将经体外增殖培养后的卵巢细胞消化后重新制备成细胞悬液；

2)将步骤1)的细胞悬液与1.5％海藻酸钠混合制成终密度为2×10⁶个/ml的细胞悬液。

3)将细胞悬液滴入轻微搅动的1.1％CaCl₂中，使其形成凝胶珠，加入0.05％多聚赖氨酸作用6min。

4)用1％CaCl₂清洗凝胶珠2次，再加入0.15％海藻酸钠，作用5min。

5)先后用1％CaCl₂和生理盐水清洗凝胶珠，加入0.05mol/L构椽酸钠pH 7.4，作用6min。

6.如权利要求5所述的方法，其中步骤1)所述卵巢细胞通过如下方法获得：取卵巢组织，剪碎后，加入消化液置于37℃恒温水浴摇床消化，30min后加入含10％FBS培养液终止消化，179g离心10min，去除上清液，以无血清培养液清洗后制成细胞悬液，经60目细胞筛过滤，以10⁶的密度接种于培养瓶内，加入D/F12全培养液，置于37℃5％CO₂培养箱培养，待细胞长满融合后，以0.25％胰蛋白酶与0.02％EDTA 1∶1混合消化液消化，将消化后的细胞重新制备成细胞悬液，进行继代增殖培养。

7.如权利要求1～2任一项所述的卵巢细胞微囊在制备治疗卵巢早衰生物制剂中的应用。

8.如权利要求1～2任一项所述的卵巢细胞微囊在制备防治女性更年期综合征的生物制剂中的应用。

9.如权利要求1～2任一项所述的卵巢细胞微囊在制备防治机体的退行性病变的生物制剂中的应用。

10.如权利要求1～2任一项所述的卵巢细胞微囊在女性美容的生物制剂中的应用。