[发明专利]栽培小麦Brock中一个受白粉菌诱导应答的基因cDNA序列及其获得方法

说明书

技术领域

本发明属于农业生物基因工程技术领域，特别涉及栽培小麦Brock中一个受白粉菌诱导应答的cDNA序列及其获得方法。

技术背景

栽培小麦Brock强抗白粉病，对华北地区流行的15号优势小种免疫。抗白粉病特性分析证实，Brock存在一个抗白粉病新基因，位于染色体3BL上(Wang et al.，PlantProduction Science，2004，7(3)：319；Wang et al.，Plant Production Science，2005，8(5)：578)。由于小麦中抗白粉病基因抗性退化和抗源的缺乏，克隆Brock中的新基因，对于抗病机理研究和抗白粉病育种都有重要意义，为此，我们利用经白粉菌15号优势小种胁迫5d的Brock总RNA为模板，以带接头的OligodT为逆转录引物，逆转录合成cDNA第一链，然后根据已发表的NBS类抗病基因同源序列设计简并引物进行PCR，结果获得一条比预期分子量大的cDNA片段(NBS片段一般为500bp左右)，将其克隆并测序，发现该片段两端分别有上游和接头引物，进而进行测序，发现该片段与报道的小麦的TCTP(translationally controlled tumor protein，TCTP)基因的cDNA序列(gi|21070378)有97％的同源性。

翻译控制肿瘤蛋白(translationally controlled tumor protein，TCTP)最初是在鼠肿瘤细胞中被发现的(Chitpatima S，et al.，Nucleic Acids Res，1988，16(5)：2350)，受翻译过程所阻遏，与肿瘤生长相关(Bohm H，et al.，Biochem.Int，1989，19：277)，因此被命名为翻译控制肿瘤蛋白(Gross B，et al.，Nucleic Acids Research，1989，17：8367；Bommer UA，et al.，Cell Mol Biol Res，1994，40：633)，但是以后的研究发现TCTP的表达也受转录水平的调控(Xu A，et al.，Biochem J，1999，342：683；Kang B S，et al.，J Genet，1996，18(2)：143)。除肿瘤细胞外，TCTP还存在于许多除肾细胞外的人类的正常细胞中(ThawP，et al.，Nat Struct Biol，2001，8(8)：701)，并先后在许多生物体内发现TCTP，其中包括植物、蚯蚓、寄生虫、水螅、酵母等。研究表明，TCTP具有多种生物学功能，如细胞外组胺释放(MacDonald S M，et al.，Science，1995，269：688)，微管和钙结合蛋白(Yannick G，et al.，Journal of Cell Science，1999，112：1257)、抗凋亡等(Sinha P，et al.，Molecular and Biochemical Parasitology，2000，121：107)，并且发现TCTP在高等植物中也广泛存在，重金属(Al)胁迫(Vladimir E，et al.，Journal of Experiment Botany，2003，54：2745)、黑暗诱导(Kimiyo SO，et al.，Plant Cell Physiol，1998，39(3)：357)均可引起TCTP mRNA的积累和表达。TCTP的这一特性启示我们，它可能也与小麦的抗白粉病特性有关。为此，我们用RACE方法，获得了该基因的全长cDNA，并对该cDNA进行了基因的结构分析、氨基酸序列推导、特征结构预测和白粉菌诱导实验，我们获得了Brock中的TCTP全长基因，功能分析证实了我们的推测，它参与了小麦对白粉菌的抗性反应。

发明内容

本发明的目的在于公开了栽培小麦Brock中一个受白粉菌诱导应答的新基因cDNA序列。

本发明的另一个目的在于公开了栽培小麦Brock中一个受白粉菌诱导应答的TCTP基因cDNA序列编码的168aa多肽链氨基酸序列。该多肽链具有2个特征结构区(TCTP1和TCTP2)和7个可能的功能位点。

本发明的再一个目的在于公开了栽培小麦Brock中一个受白粉菌诱导应答的新基因cDNA序列的获得方法。