[发明专利]球虫重组卡介苗及制备方法无效
| 申请号： | 200710056370.7 | 申请日： | 2007-11-30 |
| 公开（公告）号： | CN101234196A | 公开（公告）日： | 2008-08-06 |
| 发明（设计）人： | 李建华;张西臣;王秋悦;宫鹏涛;杨举 | 申请（专利权）人： | 吉林大学 |
| 主分类号： | A61K39/012 | 分类号： | A61K39/012;C12N15/66;A61P33/02 |
| 代理公司： | 吉林长春新纪元专利代理有限责任公司 | 代理人： | 陈宏伟 |
| 地址： | 130062吉*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组 卡介苗 制备 方法 | ||
1、一种球虫重组卡介苗，其特征在于：首先获得球虫保护性抗原基因，进行TA克隆，测序鉴定正确后酶切回收目的片段，再分别与同样进行酶切反应的大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体PMV261或整合表达载体PMV361相连，重组质粒转化到BCG，经抗性和PCR筛选得到阳性球虫重组卡介苗。
2、一种穿梭表达载体球虫重组卡介苗疫苗，是通过以下步骤制备的：从构建球虫杂交虫株F2cDNA表达文库中筛选出1个Rhomboid蛋白家族相关基因，根据已克隆的柔嫩艾美耳球虫Rhomboid新基因序列的开放阅读框设计引物进行PCR，TA克隆；测序鉴定正确后进行双酶切，切胶回收，与进行同样酶切的pMV261穿梭表达载体进行连接，转入DH5α中，将重组质粒Rho-261电穿孔转化卡介苗中，37℃培养至对数生长期后，筛选BCG重组子，PCR证实为阳性克隆后进行45℃热诱导表达，对基因表达产物进行SDS-PAGE电泳分析及Western blotting鉴定。
3、一种整合表达载体球虫重组卡介苗疫苗，是通过以下步骤制备的：根据已克隆的球虫Rhomboid新基因序列的开放阅读框设计引物设计引物并引入酶切位点，进行PCR，TA克隆，测序鉴定正确后进行双酶切，切胶回收，与进行同样酶切的pMV361整合表达载体进行连接，转入DH5α中，将重组质粒Rho-361电穿孔转化卡介苗中，37℃培养至对数生长期后，筛选BCG重组子，PCR证实为阳性克隆后进行45℃热诱导表达，对基因表达产物进行SDS-PAGE电泳分析及Western blotting鉴定。
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