[发明专利]检测痕量过氧化氢的罗丹明S缔合物微粒酶催化荧光方法

说明书

技术领域：

本发明涉及H₂O₂的检测方法，特别是检测痕量过氧化氢的罗丹明S缔合物微粒酶催化荧光方法。

背景技术：

过氧化氢是一种强氧化剂，可作为漂白剂、消毒剂、脱氧剂、液体燃料推进剂等被广泛应用于化学品合成、造纸、环保、医药、纺织、矿业及农业废料加工等领域。长期接触过氧化氢会毛发脱色，出现呼吸道及皮肤刺激等症状。国内外目前检测过氧化氢的方法主要有常规滴定法、电化学法、分光光度法、荧光法、化学发光法、色谱法。这些方法中有的是干扰因素多，有的是仪器较复杂昂贵，有的是灵敏度低，测量有误差。

发明内容：

本发明的目的是要为克服现有技术的不足，而提供一种灵敏度高、检测快速准确的检测痕量过氧化氢的罗丹明S缔合物微粒酶催化荧光方法。

本发明通过下述技术方案来实现：

一种检测痕量过氧化氢的罗丹明S缔合物微粒酶催化荧光方法，它是利用辣根过氧化物酶(HRP)对过氧化氢催化的专一性和罗丹明S(RhS)缔合物微粒的荧光淬灭特性结合来测定过氧化氢。

在酸性条件下，HRP可以催化H₂O₂与过量的I^-反应生成I₃^-，I₃^-与RhS形成缔合物微粒(RhS-I₃^-)，从而导致体系的荧光值降低，显示出荧光猝灭效应。过氧化氢浓度在一定范围内分别与罗丹明S的荧光强度呈碱性关系。据此建立了一种灵敏度高、选择性好、简便快速测定痕量过氧化氢的荧光法。

主要反应如下：

·OH+I^-→OH^-+I₂    (2)

I₂+I^-→I₃^-    (3)

nRhS⁺+nI₃^-→(RhS-I₃)_n    (4)

具体检测方法包括如下步骤：

1.制备已知的H₂O₂浓度的测试体系，用微量取样器移取HAc-NaAc缓冲液于5mL试管中；在上述试管的溶液中加入KI、辣根过氧化物酶(HRP)、已知不同浓度的H₂O₂、罗丹明S，摇匀，定容至3ml；

2.依照步骤(1)的方法制备试剂空白体系，不加入H₂O₂；

3.用荧光光度计扫描得到的体系的激发和发射荧光光谱，在激发光波长500nm、发射波长556nm处，测定体系的荧光强度为F和F₀，计算ΔF＝F-F₀的值；

4.根据ΔF对H₂O₂的浓度关系作工作曲线；

5.依照步骤(1)的方法制备检测体系，其中加入的H₂O₂为含有H₂O₂但未知浓度的被测物，求出被测物的ΔF值；

6.依据(4)的工作曲线，计算出被测物的所含H₂O₂浓度。

其中：

步骤1所述的HAc-NaAc缓冲液的pH值为3.0-6.0，体积为0.05-1.0mL；

KI浓度为2×10^-3mol/L，体积为0.1-1mL；

HRP浓度为0.2μg/mL，体积为0.02-0.2mL；

罗丹明S浓度为2×10^-5mol/L，体积为0.1-0.8mL。

本发明的优点在于：

(1)反应在室温下进行，反应条件温和，利于推广普及；

(2)设备简单、操作简单；

(3)试剂易得、价廉；

(4)灵敏度高、快速，有较好的应用价值。

附图说明：

图1为本发明实施方式中辣根过氧化物酶催化过氧化氢与碘离子及罗丹明S缔合的激发光谱图，

其中曲线a至d表示：