[发明专利]一种快速筛选牛奶类液体样中抗菌药物残留的方法

权利要求书

1.一种快速筛选牛奶类液体样中抗菌药物残留的方法，其特征在于它包括：制备检测用液体培养基、制备含有细菌芽孢和酸碱指示剂的琼脂培养基检测管及筛选，其具体步骤如下：

(1)、制备检测用液体培养基

取0.6％～1.5％蛋白胨、0.4％～1.0％胰蛋白胨、0.15％～0.4％牛肉浸膏、0.4％～0.8％葡萄糖、0％～1.0％酵母浸膏、1.0％～2.0％氯化钠、1.0％～2.0％牛奶粉，加入去离子水，补足总体积为100％；混匀后每1000mL前述溶液再添加含0.5％氯化钙、0.25％氯化钠、0.25％氯化钾的无机盐溶液20～40mL，6μg/mL的甲氧苄氨嘧啶溶液30～60mL；再次混匀后调pH为6.8～7.6，在115℃灭菌30分钟，冷却后在0～4℃保存备用；

(2)、制备含有细菌芽孢和酸碱指示剂的琼脂培养基检测管

a、制作芽孢率达85％以上的芽孢菌液；

b、将酸碱指示剂与琼脂混合，加入去离子水，使酸碱指示剂和琼脂浓度分别达到50～100μg/mL和1.5～2％，混匀调pH7.0～7.2，并115℃灭菌30分钟；

c、灭菌完毕后，在b步骤仍处在融化状态时使其冷却至55～75℃，并迅速加入步骤a的芽孢菌液，充分混匀后立即分装于处于竖直状态的无菌管中，每支管加入50～400μL琼脂，使管内琼脂厚度达0.2～0.6厘米，竖直状态自然凝固后密封并于0～4℃冷藏备用；

(3)、筛选

用移液管I将50～200μL牛奶类液体样加入到含有细菌芽孢和酸碱指示剂的琼脂培养基检测管，再用移液管II向琼脂培养基检测管加入50～200μL检测用液体培养基，将琼脂培养基检测管竖直置于55℃～70℃培养1.5～4小时后，根据琼脂培养基检测管内固体琼脂培养基颜色变化的性质及程度筛选出含有抗菌药物残留的样品。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述芽孢菌液为嗜热脂肪芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌芽孢菌液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述酸碱指示剂为溴甲酚紫、溴甲酚蓝或溴甲酚红指示剂。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述无菌管是内径为0.3～1.5厘米、高度为1.0～3.0厘米的透明圆柱形聚苯乙烯塑料管或容积为0.5～1.0mL透明带盖尖底离心管。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述芽孢菌液浓度为1×10⁶cfu/mL～1×10⁸cfu/mL。