[发明专利]遗传改良大豆品系GTS40－3－2检测用标准质粒分子及其构建方法

权利要求书

1、一种遗传改良大豆品系GTS40-3-2检测用标准质粒分子，其特征在于，含有遗传改良大豆品系GTS40-3-2的品系特异性序列和大豆内标准基因Lectin的特异性片段。

2、根据权利要求1所述的遗传改良大豆品系GTS40-3-2检测用标准质粒分子，其特征是，所述的大豆内标准基因Lectin，指的是大豆凝集素基因。

3、根据权利要求1所述的遗传改良大豆品系GTS40-3-2检测用标准质粒分子，其特征是，所述的遗传改良大豆品系GTS40-3-2的品系特异性序列，指的是遗传改良大豆品系GTS40-3-2外源插入载体与大豆基因组邻接区的DNA序列。

4、一种如权利要求1所述的遗传改良大豆品系GTS40-3-2检测用标准质粒分子的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

①利用数据库进行生物信息学分析，获得大豆内标准基因Lectin、遗传改良大豆品系GTS40-3-2的品系特异性序列；

②设计PCR特异性引物；

③特异性扩增大豆内标准基因Lectin和遗传改良大豆品系GTS40-3-2的品系特异性序列；

④大豆内标准基因Lectin和遗传改良大豆品系GTS40-3-2品系特异性序列的拼接；

⑤含有新的重组DNA片段的质粒分子克隆，得到标准质粒分子pMD-RRS。

5、根据权利要求4所述的遗传改良大豆品系GTS40-3-2检测用标准质粒分子的构建方法，其特征是，所述的大豆内标准基因Lectin，指的是大豆凝集素基因，其在大豆基因组中高度保守，具有种间特异性、种内非特异性和单拷贝数的特点；所述的遗传改良大豆品系GTS40-3-2的品系特异性序列，指的是遗传改良大豆品系GTS40-3-2外源插入载体与大豆基因组邻接区的一段DNA序列。

6、根据权利要求4所述的遗传改良大豆品系GTS40-3-2检测用标准质粒分子的构建方法，其特征是，所述的PCR特异性引物，指的是长度为28±10nt的寡核苷酸链，其与大豆Lectin基因或者遗传改良大豆品系GTS40-3-2的品系特异性序列完全相同或者互补。

7、根据权利要求4所述的遗传改良大豆品系GTS40-3-2检测用标准质粒分子的构建方法，其特征是，所述的特异性扩增，指的是利用设计的PCR引物特异性扩增内标准基因Lectin的一段序列和遗传改良大豆品系GTS40-3-2的品系特异性序列。

8、根据权利要求4所述的遗传改良大豆品系GTS40-3-2检测用标准质粒分子的构建方法，其特征是，所述的拼接，指的是利用重叠PCR技术将大豆内标准基因Lectin和遗传改良大豆品系GTS40-3-2品系特异性序列两个独立的DNA片段连接融合成一个重组的新DNA片段。

9、根据权利要求4所述的遗传改良大豆品系GTS40-3-2检测用标准质粒分子的构建方法，其特征是，所述的分子克隆，指的是将上述得到的重组特异性DNA片段按照设计的限制性内切酶酶切位点连接到质粒载体pMD18-T上，获得标准质粒分子pMD-RRS。