[发明专利]一种抗体亲和层析纯化溶葡萄球菌酶的方法

权利要求书

1.一种抗体亲和层析纯化溶葡萄球菌酶的方法，其特征在于，包括如 下步骤：

(1)溶葡萄球菌酶抗体的处理：

将含有溶葡萄球菌酶抗体的样品通过预先用缓冲液A平衡好的装有 proteinA树脂的层析柱，然后用缓冲液A清洗上样后的proteinA层析柱； 再用pH2.0～4.0的缓冲液B将溶葡萄球菌酶抗体从层析柱上洗脱，并收集 洗脱峰，冻干；

(2)免疫亲和层析介质的制备

将步骤(1)收集的冻干产物与亲和层析介质混合，偶联反应，制得免 疫亲和层析介质；

(3)溶葡萄球菌酶用免疫亲和层析介质进行纯化

将溶葡萄球菌酶样品通过预先用缓冲液A平衡好的装有步骤(2)的免 疫亲和层析介质的层析柱；

然后用缓冲液A清洗上样后的免疫亲和层析柱；

再用pH2.5～4.5的缓冲液C将溶葡萄球菌酶从层析柱上洗脱，并收集 洗脱峰；

所述缓冲液A选自PBS、Tris-HCl或硼酸缓冲液中的一种以上，缓冲 液A的pH为7.0-9.0；

所述缓冲液B选自Na₂HPO₄-柠檬酸、Gly-HCl或邻苯二甲酸-HCl缓 冲液中的一种以上；

所述缓冲液C选自醋酸-醋酸钠、Na₂HPO₄-柠檬酸或柠檬酸-柠檬酸钠 缓冲液中的一种以上。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所说的缓冲液A平衡装 有protein A树脂的层析柱的方法，包括如下步骤：用pH7.0-9.0的缓冲液A 通过层析柱，用量为层析柱体积的3～10倍。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所说的缓冲液A清洗上 样后的proteinA树脂层析柱的方法，包括如下步骤：用pH7.0-9.0的缓冲液 A清洗上样后的protein A树脂层析柱，用量为protein A树脂层析柱体积的 3～10倍。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所说的亲和层析介质选 自交联琼脂糖、纤维素、硝化纤维素、丙烯酰胺聚合物、聚醚砜或脱乙酰 壳多糖中的一种以上。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所说的缓冲液平衡免疫 亲和层析介质的层析柱包括如下步骤：将pH7.0-9.0的缓冲液A通过装有免 疫亲和层析介质的层析柱，用量为层析柱体积的3～10倍。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所说的缓冲液A清洗上 样后的免疫亲和层析柱包括如下步骤：用pH7.0-9.0的缓冲液A清洗上样后 的免疫亲和层析柱，用量为层析柱体积的3～10倍。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，缓冲液B 的用量为protein A树脂层析柱体积的3～10倍，步骤(3)中，缓冲液C的 用量为层析柱体积的3～10倍。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，缓冲液C 以每分钟1～4ml的流速将溶葡萄球菌酶从层析柱上洗脱。