[发明专利]一种合成RNA单体的方法

说明书

本发明公开了一种合成RNA单体的方法。该方法中所采用的RNA合成单体以 其独特的2’-保护基为出发点，RNA合成单体结构不同于以往的RNA合成单体。 其特点在于该保护基在酸性脱保护条件下稳定，在硷性脱保护条件下也很稳定。 在固相合成完成后，在把5’-DMT保护基脱掉而2’-保护基仍在链上的情况下可 以进行高压液相纯化，一级纯化后的产品可以在适当的条件下将2’-保护基完 全脱下来，进一步纯化后即可与另一条互补链退火成双链。由此合成及纯化获 得的RNA寡核苷酸纯度可达97％以上，纯化回收率可达55％以上。

技术领域

本发明涉及一种RNA单体的制备方法。

背景技术

RNA单体目前由Glen Research，Transgenomic，ChemGene等少数几个大公 司垄断生产，国内无任何RNA单体生产厂家；我们依靠自有技术生产的RNA单体 质量指标高于现有厂家生产产品；

发明内容

本发明的目的在于采用独特的2’-保护基为出发点，合成RNA单体。 本发明的上述目的是通过下述技术方案实现的：

A.制备2’-保护基1-(3-氯苯)-4-哌啶烯(CPP)；

B.尿苷单体合成；

C.胞苷单体合成；

D.腺苷单体合成；

E.鸟苷单体合成；

所述的RNA单体合成方法，其特征在于：

采用独特的2’-保护基1-(3-氯苯)-4-哌啶烯(CPP)为出发点，合成RNA 单体。

附图说明

图1为CPP制备方法结构图：

图2为尿苷单体合成流程图：

图3为胞苷单体合成流程图：

图4为腺苷单体合成流程图：

图5为鸟苷单体合成流程图：

具体实施方式

2’-保护基CPP的制备方法：

3-氯丙酰氯与乙烯在刘易斯酸的作用下生产1，5-二氯戊酮，再与3-氯 苯胺缩合形成N-(3-氯苯)-哌啶酮，后者再与甲醇缩合生成二甲基-N-(3- 氯苯)-哌啶缩酮，最后再在减压加热条件下脱掉一分子甲醇生成所要的 1-(3-氯苯)-4-哌啶烯(CPP)；

RNA合成单体的制备：

尿苷单体：3’，5’-氢氧基用Marcwicz保护基进行保护，然后在酸 性条件下引入2’-CPP保护基，随后脱去Marcwicz保护基，5’-氢氧 基用1，4-二甲氧基三苯甲烷氯(DMTrCl)进行保护，最后在3’-位用磷酸化 试剂进行亚磷酰胺化，制得尿苷单体。

胞苷单体、腺苷单体、鸟苷单体制备：将胞苷/腺苷/鸟苷的碱基先用苯 甲酰基保护，后继步骤与鸟苷相同。