[发明专利]α－突触核蛋白与Sph1的相互作用位点及其在筛选帕金森症药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物化学和分子生物学的研究领域，具体涉及α-突触核蛋白与 Synphilin-1蛋白的相互作用机制以及在药物开发中的应用。

背景技术

帕金森症(Parkinson’s disease)是一种常见的神经退行性疾病，在临床 上，它主要表现为反应迟缓，震颤，机体僵硬，进一步失去平衡等症状。对PD 病人脑组织研究发现，疾病患者中脑黑质多巴胺能神经元丧失，存活的神经元 细胞质中有称为Lewy体(Lewy body，一种同心圆的玻璃样小体)的包涵体出现。 帕金森症发病原因尚未完全明确，5-10％病人有家族史，可能与α-突触核蛋白 (α-synuclein，α-Syn)和Parkin等的基因的异常有关；其它如氧化压力，线 粒体功能障碍以及环境毒素等因素都可能引起类似帕金森症的表现，称为帕金 森综合症。

Lewy包涵体已经成为帕金森病中变性神经元的标志性病变，研究表明， 许多神经退行性疾病，包括阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease)、帕金森症 和DLB症(Dementia with Lewy Body)等病人脑组织中都有Lewy包涵体形成。 Lewy体中有多种异常积聚的蛋白质，主要包括α-Syn、泛素等，而这些蛋白质 在正常神经元内都行使一定的功能。说明这类疾病与蛋白质(特别是α-Syn蛋 白)的异常积聚密切相关。

1999年，Simone Engelender等人用酵母双杂交的方法找到了与α-Syn相 互作用的蛋白，并命名为Synphilin-1(简称Sphl)，他们把α-Syn中间的NAC 片段(α-Syn的61-95位序列)和Sph1共转染到HEK293细胞后发现有Lewy体 样包涵体形成，然而后续的一些实验结果并不支持该结论。

综上，尽管本领域人员对于α-Syn以及Sph1的功能以及作用机制有所了 解，然而，还需要进一步深入地研究α-Syn和Sph1的相互作用机制以及进一 步验证它们与帕金森症的关系，以发掘它们的药用价值。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种可用于筛选抑制α-突触核蛋白与Sph1蛋 白相互作用的物质的多肽，该多肽的编码基因以及应用。

本发明的另一目的在于提供一种筛选抑制α-突触核蛋白与Sph1蛋白相互 作用的潜在物质的方法。所述方法以α-突触核蛋白(α-Syn)N-端的12个氨基酸 残基作为筛选的靶点。

在本发明的第一方面，提供一种分离的多肽(Syn12)，所述的多肽具有SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列。

在本发明的第二方面，提供一种分离的DNA，所述的DNA编码所述的多肽。

在本发明的另一优选例中，还包括一种载体，所述的载体含有所述的DNA。

在本发明的另一优选例中，还包括一种遗传工程化的细胞它含有所述的载 体；或它的基因组中整合有所述的DNA。

在本发明的另一优选例中，所述的细胞中还含有：Sph1蛋白或其编码基因。

在本发明的第三方面，提供所述的多肽的用途，用于筛选抑制α-突触核蛋 白与Sph1蛋白相互作用的潜在物质；或用于制备特异性结合该多肽的抗体或配体。

在本发明的第四方面，提供一种筛选抑制α-突触核蛋白与Sph1蛋白相互作 用的潜在物质的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)将候选物质与α-突触核蛋白元件和Sph1蛋白元件相互作用的体系接触， 所述的α-突触核蛋白元件包含SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列，但不是全长的α- 突触核蛋白；所述的Sph1蛋白元件是Sph1蛋白全长或其活性片段；和

(b)检测候选物质对α-突触核蛋白元件和Sph1蛋白元件相互作用的影响；

其中，若所述候选物质可抑制α-突触核蛋白元件和Sph1蛋白元件相互作用， 则表明该候选物质是抑制α-突触核蛋白与Sph1蛋白相互作用的潜在物质。

在本发明的另一优选例中，所述的Sph1蛋白元件包含SEQ ID NO：2所示序 列中第349-556位氨基酸。

在本发明的另一优选例中，所述的α-突触核蛋白元件具有SEQ ID NO：4所 示的氨基酸序列。

在本发明的另一优选例中，所述方法包括：