[发明专利]一种检测少儿肥胖遗传易感风险的试剂盒

权利要求书

1. 一种检测少儿肥胖遗传易感风险的试剂盒，其特征在于：包括检测载脂蛋白E基因(APOE)上rs429358号SNP位点和rs7412号SNP位点的特异性引物对及DNA测序引物、检测脂蛋白脂酶基因(LPL)上rs320号SNP位点、瘦素(LEP)基因上rs13306517号SNP位点和过氧化物酶体增生激活受体γ(PPARγ)基因上rs1801282号SNP位点的特异性引物对及特异性荧光探针对、Taq酶、dNTP混合液、MgCl₂溶液、荧光定量PCR反应缓冲液、PCR反应缓冲液、SAP酶、ExoI酶、BigDye mix，EDTA溶液、70％乙醇溶液、100％乙醇溶液、HIDI溶液、去离子水等。

2. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的特异性引物对是指针对载脂蛋白E基因(APOE)上rs429358号SNP位点和rs7412号SNP位点、脂蛋白脂酶基因(LPL)上rs320号SNP位点、瘦素(LEP)基因上rs13306517号SNP位点和过氧化物酶体增生激活受体γ(PPARγ)基因上rs1801282号SNP位点，能特异性扩增出包含这5个SNP位点的DNA片段的引物对。

3. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的特异性荧光探针对是指针对脂蛋白脂酶基因(LPL)上rs320号SNP位点、瘦素(LEP)基因上rs13306517号SNP位点和过氧化物酶体增生激活受体γ(PPARγ)基因上rs1801282号SNP位点而设计，能通过荧光定量PCR技术特异性检测出这3个SNPs位点基因型的Taqman探针对。

4. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的DNA测序引物是指针对APOE基因上rs429358号SNP位点和rs7412号SNP位点而设计，能通过DNA测序技术特异性检测出这2个SNPs位点基因型的DNA测序引物。

5. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所含的特异性引物对选自具有SEQ ID NO：1和2、3和4、5和6、7和8所示序列的引物对。

6. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所含的特异性荧光探针选自具有SEQ ID NO：9和10、11和12、13和14所示序列的Taqman探针对。

7. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所含的DNA测序引物选自具有SEQ ID NO：15所示序列的引物。

8. 根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于试剂盒的组分和含量包括：

1)荧光定量PCR反应套装：10X荧光定量PCR反应缓冲液3μl，25mM dNTP混合液0.3μl，25mM MgCl2溶液1.8μl，5units/μl Taq DNA聚合酶0.075μl，20μM特异性引物对每条引物各0.225μl，10μM特异性荧光探针对每条探针各0.25μl，去离子水15.975μl。

2)PCR反应套装：10X PCR反应缓冲液2.5μl，25mM dNTP混合液0.2μl，25mM MgCl2溶液1.5μl，5units/μl Taq DNA聚合酶0.125μl，20μM特异性引物对每条引物各0.25μl，去离子水19.175μl。

3)PCR产物纯化套装：1units/μl SAP酶0.75μl，10units/μl ExoI酶0.375μl，去离子水3.875μl。

4)测序反应套装：25％BigDye mix 1μl，3.2μM DNA测序引物1μl，125mM EDTA溶液1μl，100％乙醇溶液15μl，70％乙醇溶液30μl，HIDI溶液8μl，去离子水2μl。

本试剂盒供一人份检测应用，试剂盒的保存温度为-20℃。