[发明专利]固态发酵微生物总DNA提取方法

权利要求书

1.一种固态发酵微生物总DNA提取方法，包括以下步骤：

a.样品的洗涤：固态发酵样须用0.1M磷酸盐缓冲液洗涤三次；

b.DNA的提取：往上述洗涤后的固态发酵样中加入异丙醇，用超声波冰浴超声，样品破碎以后，高速离心至样品完全沉淀，去上清液；往沉淀中加入十六烷基三甲基溴化胺抽提液，65℃水浴，完全反应后，加入等体积的氯仿-异戊醇，高速离心至沉淀完全，并回收水相；在回收水相中加入1/10体积的CTAB-NaCl溶液，65℃水浴待完全反应后，加入等体积的氯仿-异戊醇，再高速离心至沉淀完全，并回收水相；在回收水相中加入0.6倍体积的预冷异丙醇，并在-20℃放置待充分反应后，再高速离心至沉淀完全，去上清液；沉淀用预冷的乙醇重复洗涤和干燥，干燥后的沉淀溶于TE缓冲液中，得到粗提DNA；

c.DNA的纯化：上述粗提的DNA经纯化试剂盒纯化以后，在其纯化产物中加入核糖核酸酶，37℃水浴消化，以除去RNA。

2.根据权利要求1所述的固态发酵微生物总DNA提取方法，其特征在于所述步骤b中每1g固态发酵样中加入异丙醇4mL。

3.根据权利要求1或2所述的固态发酵微生物总DNA提取方法，其特征在于所述步骤b中，超声过程中破碎5.2s，停2.4s，振幅45％。

4.根据权利要求1或2所述的固态发酵微生物总DNA提取方法，其特征在于所述步骤b中，氯仿-异戊醇体积比为24∶1。

5.根据权利要求1或2所述的固态发酵微生物总DNA提取方法，其特征在于所述步骤b中，每1g沉淀中加入CTAB抽提液1000μL，所述加入的CTAB抽提液中还含有体积百分数为2％的β-巯基乙醇。

6.根据权利要求1或2所述的固态发酵微生物总DNA提取方法，其特征在于所述步骤b中，异丙醇、氯仿、异戊醇质量分数均＞99％。

7.根据权利要求1或2所述的固态发酵微生物总DNA提取方法，其特征在于所述步骤b中，CTAB-NaCl溶液组成为：10mg/mL CTAB，0.7mol/L NaCl。

8.根据权利要求1或2所述的固态发酵微生物总DNA提取方法，其特征在于所述步骤c中，加入的核糖核酸酶终浓度为0.5μg/mL。