[发明专利]检测唾液中滥用毒品的多联免疫层析试纸条、系统及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医学检验领域，涉及一种基于免疫层析原理对唾液中毒品进行快速多联检测的免疫层析试纸条、系统及制备方法。

背景技术

毒品犯罪是当今国际社会的一大公害。毒品滥用已成全球性的问题，被认为是当今世界的瘟疫和社会的毒瘤。自改革开放以来，随着国门的打开，国际贩毒集团开始从我国边境进行毒品渗透活动，90年代呈迅速蔓延之势，成为一个严重的社会问题。且对每种毒品需要单项检测具有取材难，检测复杂，成本大等缺陷。

在毒品的检测中，国内外主要采用免疫层析法、酶联免疫吸附法(ALISA)、PCR、放射性免疫等方法对尿液、血液、组织以及毛发等样本进行检测。

相比于尿液、血液、组织以及毛发等来源的样本，唾液样本有其不可比拟的有点：

(1)尿液样本涉及伦理与隐私，对于采样存在一定的困难和样本的保真性存在怀疑。

(2)血液样本涉及伦理与创伤，对于供样人存在一定的感染风险。

(3)组织和毛发样本前处理的程序负责，检测方法多为ELISA，GC/MS等大型仪器设备，技术要求更高，不适合现场快速检测。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测唾液中滥用毒品的多联免疫层析试纸条，能发挥彩色胶乳、胶体金或胶体硒标记层析检测技术快速、简便、操作方便的优点，避免现有尿液中毒品检测的缺点和不足，从而实现对唾液中毒品快速检测的目的。

本发明所述的检测唾液中滥用毒品的多联免疫层析试纸条，该试纸条是在底衬上顺次相互搭接地粘贴样品垫、涂覆彩色胶乳、胶体金或胶体硒微粒标记蛋白的玻璃纤维膜、包被膜以及吸水纸而形成的反应膜条，所述包被膜上设有控制区，以及两个或两个以上的检测区，每个检测区包被有相应的毒品抗原，控制区包被抗鼠抗体。

本发明的另一目的在于提供一种检测唾液滥用毒品的多联免疫层析试纸条的制备方法。

本发明所述的检测唾液滥用毒品的多联免疫层析试纸条的制备方法，按涂覆在玻璃纤维膜上的微粒的不同，可分为a涂覆彩色胶乳微粒和b涂覆胶体金或胶体硒微粒两种制备方法。

a、当采用彩色胶乳微粒涂覆时，反应膜条的制备包括以下步骤：

A.彩色胶乳的共价活化：超声波处理彩色胶乳微球体30秒后，调节浓度为2％～10％彩色胶乳微球活化浓度为1％，8000×g离心1～5分钟，离心后收集沉淀物用蒸馏水或者50mM～200Mm pH6.0～7.0磷酸钠溶液溶解至初始体积，并超声波处理30秒；加入一定量的20～100mg/mlEDC(碳二亚胺)，混匀；室温孵育30分钟后8000×g、离心1～5分钟，沉淀用20mM～100mM的pH5.0～6.0的柠檬酸缓冲液溶解至初始体积，放置于2～8℃环境中备用，以标记蛋白质；

B.每种标记物的制备：将上述活化后的彩色胶乳超声波处理30秒后，按照50ug～500ug毒品-BSA(牛血清白蛋白，bovine serum albumin，)、单克隆抗体或毒品-OVA(卵白蛋白，Ovalbumin，OVA)单克隆抗体/ml活化彩色胶乳的比例加入需标记的单克隆抗体，混匀后室温搅拌反应1.5-3小时，2-4次离心洗涤，每次8000×g、离心1～5分钟，沉淀用PBS-TBN(磷酸盐缓冲液PB，含氯化钠NaCl，吐温Tween-20，牛血清白蛋白BSA，叠氮钠NaN3)溶解并超声波处理25-35秒，用PBS-TBN恢复至标记前的体积，放置2～8℃备用；

C.涂覆有标记物的玻璃纤维膜的制备：将标记的两个或两个以上的毒品抗原的单克隆抗体彩色微球标记物，按照效价试验匹配的结果，以1∶1∶1…～1∶5∶5…比例混和均匀，按照每毫升溶液铺20～60平方厘米涂覆玻璃纤维膜，25℃～40℃干燥16小时，封袋，板贴备用；

D.包被膜的制备：两种或两种以上毒品抗原和抗鼠抗体包被到硝酸纤维素膜上并封闭：分别将对应的两种或两种以上毒品抗原和抗鼠IgG用包被缓冲液调节浓度，喷膜液量为20ul/35cm，用包被缓冲液稀释抗鼠IgG，调节浓度为1.0～3.0mg/ml，用包被缓冲液分别稀释毒品抗原，调节浓度为0.1～2.5mg/ml，并将两种或两种以上毒品抗原及抗鼠IgG分别喷到硝酸纤维素膜上对应的检测区和控制区，保持区域之间的间隔均大于或等于3mm，室温凉干20分钟；25℃～37℃在封闭液浸泡60分钟，取出后置25℃～37℃烘干处理2小时，封袋，得到包被膜，以备贴板用；

E.在底衬上顺次相互搭接地粘贴样品垫、涂覆彩色胶乳微粒标记蛋白的玻璃纤维膜、包被膜以及吸水纸，得到试纸板，按照要求切割成不同宽度的反应膜条；