[发明专利]检测唾液中滥用毒品的多联免疫层析试纸条、系统及其制备方法

权利要求书

1、一种检测唾液中滥用毒品的多联免疫层析试纸条，其特征是，该试纸条是在底衬上顺次相互搭接地粘贴样品垫、涂覆有彩色胶乳、胶体金或胶体硒微粒标记蛋白的玻璃纤维膜、包被膜以及吸水纸而形成的反应膜条，所述包被膜上设有控制区、以及两个或两个以上的检测区，每个检测区包被有相应的毒品抗原，控制区包被抗鼠抗体。

2、根据权利要求1所述的多联免疫层析试纸条，其特征是，玻璃纤维膜上涂覆的彩色胶乳、胶体金或胶体硒微粒的直径范围为0.01μm～1μm。

3、一种制备如权利要求1所述的检测唾液中滥用毒品的多联免疫层析试纸条的方法，其特征是，

(1)当采用彩色胶乳微粒涂覆时，主要包括以下步骤：

A.彩色胶乳的共价活化：超声波处理彩色胶乳微球体30秒后，调节浓度为2％～10％彩色胶乳微球活化浓度为1％，8000×g离心1～5分钟，离心后收集沉淀物用蒸馏水或者50mM～200Mm pH6.0～7.0磷酸钠溶液溶解至初始体积，并超声波处理30秒；加入一定量的20～100mg/mlEDC，混匀；室温孵育30分钟后8000×g离心1～5分钟，沉淀用20mM～100mM的pH5.0～6.0的柠檬酸缓冲液溶解至初始体积，放置于2～8℃环境中备用，以标记蛋白质；

B.每种标记物的制备：：将上述活化后的彩色胶乳超声波处理30秒后，按照50ug～500ug毒品-BSA单克隆抗体或毒品-OVA单克隆抗体/ml活化彩色胶乳的比例加入需标记的单克隆抗体，混匀后室温搅拌反应1.5-3小时，2-4次离心洗涤，每次8000×g、离心1～5分钟，沉淀用PBS-TBN溶解并超声波处理25-35秒，用PBS-TBN恢复至标记前的体积，放置室温备用；

C.涂覆有标记物的玻璃纤维膜的制备：将标记的多个毒品抗原的单克隆抗体彩色微球标记物，按照效价试验匹配的结果，以1∶1∶1…～1∶5∶5…的比例混和均匀，按照每毫升溶液铺20～60平方厘米涂覆玻璃纤维膜，25℃～40℃干燥16小时，封袋，板贴备用；

D.包被膜的制备：两种或两种以上毒品抗原和抗鼠抗体包被到硝酸纤维素膜上并封闭：分别将对应的两种或两种以上毒品抗原和抗鼠IgG用包被缓冲液稀释，稀释毒品抗原为浓度为0.1～2.5mg/ml，稀释抗鼠抗体的浓度为1～3mg/ml，喷膜液量为20ul/35cm，并将两种或两种以上毒品抗原及抗鼠IgG分别喷到硝酸纤维素膜上对应的检测区和控制区，保持区域之间的间隔均大于或等于3mm，室温凉干20分钟；25℃～37℃在封闭液浸泡60分钟，取出后置25℃～37℃烘干处理2小时，封袋，得到包被膜，以备贴板用；

E.在底衬上顺次相互搭接地粘贴样品垫、涂覆彩色胶乳微粒标记蛋白的玻璃纤维膜、包被膜以及吸水纸，得到试纸板，按照要求切割成不同宽度的反应膜条；

或(2)当采用胶体金或胶体硒微粒涂覆时，包括以下步骤：

A.胶体金或胶体硒标记蛋白的制备：用0.1M碳酸钾调节胶体金或胶体硒pH值至7.0～8.0，按6～20ug毒品-BSA或毒品-OVA单克隆抗体/ml胶体金或胶体硒加入一种毒品单克隆抗体，混匀后静置，离心处理，弃去上清，将沉淀用标记洗涤液洗涤，将沉淀用十分之一初始胶体金或胶体硒标记蛋白保存液溶解，置2℃～8℃备涂覆玻璃纤维膜用；试纸条上有多个检测区，要标记对应的多个毒品抗原的单克隆抗体；

B.涂覆有标记物的玻璃纤维膜的制备：将两种或两种以上的制备好的胶体金或胶体硒标记的毒品单克隆抗体根据它们效价试验匹配的结果，以1∶1∶1….～1∶5∶5…比例混和均匀，涂覆在玻璃纤维膜上，涂覆方法是将制备好的胶体金或胶体硒标记的毒品单克隆抗体均匀的铺在玻璃纤维膜上，每毫升溶液铺8～40平方厘米，25℃～40℃干燥16小时，封袋，以备板贴用；

C.包被膜的制备：用包被膜缓冲液稀释各种毒品抗原和抗鼠IgG至浓度为0.1～2.5mg/ml，把两种或两种以上毒品抗原和抗鼠IgG喷印在硝酸纤维素膜对应的检测区和控制区上，每个区域之间的间隔为3-5mm，应细致均匀，凉干后在25℃～37℃封闭液中浸泡40-60分钟，取出后于25℃～37℃烘干2小时，封袋，得到包被膜，以备贴板用；

D.在底衬上顺次相互搭接地粘贴样品垫、涂覆胶体金或胶体硒标记的毒品单克隆抗体的玻璃纤维膜、包被膜以及吸水纸，得到试纸板，按照要求切割成不同宽度的反应膜条。