[发明专利]一种新的重组蛇毒金属蛋白酶的表达、复性及其生物学活性

权利要求书

1、一种新的重组蛇毒金属蛋白酶基因，其特征在于：是具有序 列1的核苷酸或碱基序列；该序列前面330个碱基来自巴西蛇毒金属 蛋白酶cDNA的5’端编码序列，后面285个碱基来自中国皖南尖吻 蝮蛇毒金属蛋白酶cDNA的3’端编码序列。

2、根据权利要求1所述的重组蛇毒金属蛋白酶基因，其特征在 于：用表达载体pET-15b在大肠杆菌中以包涵体的形式表达了该重组 蛇毒金属蛋白酶；经体外复性后，该重组蛋白酶具有明显的蛋白水解 活性。

3、根据权利要求1或2所述重组蛇毒金属蛋白酶基因在大肠杆 菌中的表达、复性及其活性测定方法，其特征在于包括以下步骤：

(a)以巴西蛇毒金属蛋白酶基因与皖南尖吻蝮蛇毒金属蛋白酶 基因为模板或材料，通过PCR(聚合酶链式反应)技术构 建了由这两种蛇毒金属蛋白酶基因片段组成的重组(或嵌 合)蛇毒金属蛋白酶基因；

(b)在大肠杆菌中以包涵体的形式表达了该重组蛇毒金属蛋白 酶，以及包涵体的纯化过程；

(c)重组蛇毒金属蛋白酶包涵体的溶解和重组蛇毒金属蛋白酶 的体外复性过程；

(d)重组蛇毒金属蛋白酶的蛋白水解活性测定。