[发明专利]检测EB病毒gp78抗体的CBA试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医药生物技术领域，具体地说，涉及了一种用于流式细胞仪的检测血清EB病毒gp78抗体的CBA试剂盒及其制备方法。

背景技术

EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)属于γ疱疹病毒科，其基本结构包括核样物、衣壳和囊膜三部分。衣壳为20面体立体对称，由162个壳微粒组成。囊膜由感染细胞的核膜组成，其上有病毒编码的膜糖蛋白，有识别淋巴细胞上的EB病毒受体，及与细胞融合等功能。此外在囊膜与衣壳之间还有一层蛋白被膜。EB病毒仅能在B淋巴细胞中增殖，可使其转化，能长期传代。被病毒感染的细胞具有EBV的基因组，并可产生各种抗原，已确定的有：EBV核抗原(EBNA)，早期抗原(EA)，膜抗原(MA)，衣壳抗原(VCA)，淋巴细胞识别膜抗原(LYDMA)。

EB病毒在人群中广泛存在，其致病性具有明显的区域特征。在我国南方主要与鼻咽癌密切相关，鼻咽癌患者的多种EB病毒抗体水平要明显高于非患者。除LYDMA外，鼻咽癌患者EBNA、MA、VCA、EA均产生相应的lgG和IgA抗体，研究这些抗原及其抗体，对阐明EBV与鼻咽癌关系及早期诊断均有重要意义。

免疫血清学检测EB病毒感染是目前筛查鼻咽癌最常用的手段。目前间接免疫荧光(IFA)检测血清VCA/IgA、EA/IgA已在临床被广泛采用。然而这些方法对鼻咽癌的诊断价值并不高，其敏感性和特异性在不同实验室结果也不一致。鼻咽癌的诊断最终依赖活检组织的病理检查。但是活检取材在实际中会受到医院硬件、医生技术水平及患者意愿等多方面限制。因此，国内外研究者一直都在寻求一种更准确、敏感、快速、简易的诊断方法。

流式微珠分析(Cytometric bead assay，CBA)技术从诞生至今三十年中得到了发展和完善，并且大大促进了医学生物学领域的发展。此技术具有测量速度快、操作简便、稳定性好、灵敏度高等优点，已应用于多种疾病的常规临床检查中，但目前，仍没有一种成功的用流式细胞技术的检测血清中抗EB病毒膜抗原gp78抗体的试剂盒。

发明内容

本发明需要解决的技术问题是提供一种用于流式细胞仪的检测EB病毒gp78抗体的CBA试剂盒。

一种检测EB病毒gp78抗体的CBA试剂盒，包括有CBA偶联微珠，该偶联微珠是CBA空白微珠与NeutrAvidin偶联而成，且所述NeutrAvidin与偶联有生物素的EB病毒gp78抗原结合。

优选地，偶联有生物素的EB病毒gp78抗原为人工合成的具有Biotin-Ahx-Thr Ser Thr SerHis Arg Pro His Arg Arg Pro Val Ser Lys Arg Pro Thr His Lys(TSTSHRPHRRPVSKRPTHK)系列的多肽。

本发明的另一个目的是提供上述试剂盒的制备方法。

一种制备如上述检测EB病毒gp78抗体的CBA试剂盒的方法，主要包括以下步骤：

(1)准备微珠：将空白微珠涡旋混匀；取出60-80μl空白微珠，用锡箔纸包好，超声混匀；加入1.8-2.0μl 1M DTT，涡旋混匀；再放到摇床上，室温，0.5-1.5hr；加入0.8-1.2ml coupling buffer，涡旋混匀；离心，弃上清；重复用coupling buffer洗涤2-4次；重悬空白微珠于18-22μl coupling buffer；

(2)准备NeutrAvidin样品：取出85-95μl 1mg/ml的NeutrAvi din样品，放入锡箔纸包好的Ep管中；在NeutrAvidin样品中加入现配的1.8-2.3μl sulfo-SMCC；涡旋混匀；把上述中和亲和素样品反应液放到摇床上，室温，避光，0.5-1.5hr；

(3)去除未参与反应的成分：在纯化柱中加满coupling buffer，使buffer自由流出，重复两至三次；把纯化柱离心后在其中加入步骤(2)中准备好的NeutrAvidin样品；离心，去掉未修饰的蛋白；立即进行下一步；