[发明专利]检测EB病毒gp78抗体的CBA试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种检测EB病毒gp78抗体的CBA试剂盒，其特征是：包括有CBA偶联微珠，该偶联微珠是CBA空白微珠与NeutrAvidin偶联而成，且所述NeutrAvidin与偶联有生物素的EB病毒gp78抗原结合。

2.根据权利要求1所述的检测EB病毒gp78抗体的试剂盒，其特征是：偶联有生物素的FB病毒gp78抗原为人工合成的具有Biotin-Ahx-Thr Ser Thr Ser His Arg Pro His Arg Arg ProVal Ser Lys Arg Pro Thr His Lys系列的多肽。

3.一种制备如权利要求1所述的检测EB病毒gp78抗体的CBA试剂盒的方法，其特征是：主要包括以下步骤：

(1)准备微珠：将空白微珠涡旋混匀；取出60-80μl空白微珠，用锡箔纸包好，超声混匀；加入1.8-2.0μl 1M DTT，涡旋混匀；再放到摇床上，室温，0.5-1.5hr；加入0.8-1.2ml coupling buffer，涡旋混匀；离心，弃上清；重复用coupling buffer洗涤2-4次；重悬空白微珠于18-22μl coupling buffer；

(2)准备NeutrAvidin样品：取出85-95μl 1mg/ml的NeutrAvidin样品，放入锡箔纸包好的Ep管中；在NeutrAvidin样品中加入现配的1.8-2.3μl sulfo-SMCC；涡旋混匀；把上述NeutrAvidin样品反应液放到摇床上，室温，避光，0.5-1.5hr；

(3)去除未参与反应的成分：在纯化柱中加满coupling buffer，使coupling buffer自由流出，重复两至三次；把纯化柱离心后在其中加入步骤(2)中准备好的NeutrAvidin样品；离心，去掉未修饰的蛋白；立即进行下一步；

(4)偶联NeutrAvidin：把经修饰的NeutrAvidin样品加入到步骤(1)中的准备好的空白微珠中；涡旋混匀；摇床孵育，室温，1-2hr，避光；加入1.5-2.5μl NEM，涡旋混匀；摇床孵育10-20min；加入0.8-1.3ml storage buffer；离心，弃上清；重复用storage buffer洗涤三次；重悬于0.4-0.6ml storage buffer，此时终浓度大约为6×10⁶微珠/ml；4℃保存。

(5)结合多肽：取出70-80μl偶联好NeutrAvidin的微珠放到EP管中，加入70-80μl的10μg/ml的偶联有生物素的EB病毒gp78抗原；涡旋混匀；避光，室温摇床孵育1-2hr，或4℃，摇床孵育过夜；离心，弃上清；加入450-500μl洗脱缓冲液，离心；重复用洗脱缓冲液洗涤一次；弃上清，加入70-80μl贮存液，混匀后4℃保存。