[发明专利]基质金属蛋白酶导向性重组人肿瘤坏死因子融合蛋白及制备

权利要求书

1.一种基质金属蛋白酶导向性重组人肿瘤坏死因子融合蛋白，其特征在 于：融合蛋白的氨基酸序列由三部分组成：从N-端开始依次为胶原蛋白序列、 人基质金属蛋白酶底物序列和人肿瘤坏死因子-α序列，其氨基酸序列是SEQ  ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的任一氨基酸序 列。

2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白能被 MMP-1和MMP-8酶切。

3.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白经与融 合蛋白底物序列相一致的基质金属蛋白酶酶切后，分子量由20KDa转变为 17KDa和3KDa二部分，起到去除人肿瘤坏死因子-α受体结合部位封闭的效 果，其体外TNF-α样活性显著增高。

4.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白含有 MMP-2和MMP-9识别的氨基酸序列，对HO8910卵巢癌细胞有杀伤作用。

5.根据权利要求1所述的融合蛋白的编码基因，其特征在于：是SEQ ID  NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的任一DNA序列。

6.含有权利要求5所述的编码基因的表达型重组载体。

7.根据权利要求6所述的表达型重组载体，其特征在于：其为 pET-32a(+)-collagen-MMP 1，8a-hTNF、pET-32a(+)-collagen-MMP 1，8b-hTNF、 pET-32a(+)-collagen-MMP2，9a-hTNF或pET-32a(+)-collagen-MMP2，9b-hTNF。

8.根据权利要求6或7所述的表达型重组载体，其特征在于：其为诱导 型表达重组载体，通过IPTG诱导表达所述的融合蛋白。

9.含有权利要求6所述的表达型重组载体的工程菌，其特征在于：用所 述的表达型重组载体转化λDE3大肠杆菌。