[发明专利]一种采用络合共保护制备S－保护谷胱甘肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种采用络合共保护制备S-保护谷胱甘肽(1)的方法。

其中R基团表示是对L-半胱氨酸巯基的保护基团，可以是甲基、苄基、对甲基苄基、二苯甲基、三苯甲基、叔丁基、乙酰胺甲基、三甲基乙酰胺甲基、芴甲基等。

背景技术

谷胱甘肽是由L-谷氨酸、L-半胱氨酸和甘氨酸结合而成的三肽，是属于含有巯基的、小分子肽类物质，具有抗氧化作用和解毒作用，在医药领域中的广泛应用早已得到公认。

已报道有多种谷胱甘肽的化学合成方法，Douglas KT有相应的综述(Glutathione：Chemical，Biochemical and Medical Aspects，Part A.Vol.3：243-279，1989)，在这些方法中，均需要对L-谷氨酸的α-羧基和氨基分别进行保护，游离出γ-羧基后，才能进行接肽反应。接肽结束后，需要将L-谷氨酸α-羧基和氨基的保护基团脱除，获得最终产品。在反复保护-脱保护过程中，容易造成肽键断裂、消旋化等现象，从而使得收率降低、光学纯度降低。

对于L-谷氨酸的α-羧基和氨基进行共保护的方法也有报道，如：Nefkens等采用L-谷氨酸与三烷基硼反应形成硼噁唑啉酮来共保护α-羧基和氨基(见Tetrahedron，39(18)：2995-2998，1983)；Itoh等采用N-保护L-谷氨酸与多聚甲醛反应形成5-氧噁唑啉酮来共保护α-羧基和氨基(见Chem.Pharm.Bull.，17：1679，1969)。这些方法虽然能够实现L-谷氨酸的α-羧基和氨基的共保护，但仍然需要消耗大量的反应试剂，且不可回收。

因此，找到一个能够实现L-谷氨酸的α-羧基和氨基共保护并且能重复使用的方法是化学合成谷胱甘肽的关键。

发明内容

本发明目的是提供一种对L-谷氨酸的α-羧基和氨基络合共保护方法，进而通过游离γ-羧基与S-保护L-半胱氨酸和甘氨酸顺序接肽，实现谷胱甘肽的化学合成。

本发明的目的是通过下列技术措施实现的：

一种采用络合共保护制备S-保护谷胱甘肽的方法，该方法包括下列步骤：

(1)L-谷氨酸α-羧基和氨基共保护；

取手性助剂、二价金属离子盐、L-谷氨酸在碱性条件下进行反应，形成络合物，实现对L-谷氨酸α-羧基和氨基共保护。

其中反应中所采用的手性助剂为2-(N-苄基-L-脯氨酰)氨基-二苯甲酮(2a，n＝1，R’＝Ph，BPB)、2-(N-苄基吡咯-2-甲酰)氨基-二苯甲酮(2b，n＝2，R’＝Ph，BPyB)和2-(N-苄基-L-脯氨酰)氨基-苯甲醛(2c，n＝1，R’＝H，BPBa)中的一种。

络合共保护反应中所采用的二价金属离子(M²⁺)盐为Cu²⁺、Ni²⁺、Zn²⁺、Co²⁺等二价过渡金属离子的盐酸盐、硫酸盐或硝酸盐中的一种。

反应中所采用的碱可以是氢氧化钠、氢氧化钾中的一种。

(2)  络合共保护L-谷氨酸接S-保护L-半胱氨酸；

在DMF中，加入络合共保护L-谷氨酸，采用接肽试剂接上S-保护L-半胱氨酸。此步无需分离，可直接进行下一步操作。

这里所采用的S-保护L-半胱氨酸巯基的保护基(R)可以苄基、甲基、对甲基苄基、二苯甲基、三苯甲基、叔丁基、乙酰胺甲基、三甲基乙酰胺甲基、芴甲基等保护基团中的一种。所用的接肽试剂可以是DCC/HOBt、DCC/HOSu、DCC/HOAt中的一种。每组接肽试剂中两个物质的摩尔比通常保持1∶1。

(3)络合共保护谷胱二肽接甘氨酸；

前一步反应产物采用接肽试剂接上甘氨酸，完成三肽的合成。反应物倒入水中，析出固体，过滤后即可得到络合共保护S-保护谷胱甘肽。

(4)络合共保护S-保护谷胱甘肽复合物水解；

将络合共保护S-保护谷胱甘肽溶于甲醇中，溶液缓慢滴加到酸中进行水解。过滤得手性助剂，可回收重复使用。滤液蒸除溶剂，得S-保护谷胱甘肽和二价金属离子混合物。

在此步骤中所使用的酸可以是盐酸、硫酸或硫酸和盐酸混合溶液中的一种。酸的摩尔浓度可以为3mol/L。

(5)谷胱甘肽与二价金属离子交换分离；