[发明专利]甲型肝炎－乙型肝炎－戊型肝炎联合疫苗

说明书

一、技术领域

本发明属一种联合疫苗及其制备方法，特别是涉及甲型肝炎-乙型肝炎-戊型肝炎联合疫苗及其制备方法。

二、背景技术

病毒性肝炎是由多种肝炎病毒引起的以肝脏损害为主的传染性疾病，在世界各地均有流行。甲型肝炎(甲肝)是由甲型肝炎病毒(HAV)引起的急性病毒性肝炎，主要通过粪-口途径传播。1988年上海因食用毛蚶导致甲肝急性大流行，出现30余万例甲肝病例；乙型肝炎(乙肝)是由乙型肝炎病毒(HBV)感染所致，广泛流行于世界各地，我国是乙肝的高流行区，乙肝除暴发性肝炎外主要危害在于感染后变为慢性病毒携带者，并进一步发展成为慢性肝炎甚至肝癌，危害十分严重，是我国公共卫生的一个重要问题；戊型肝炎(戊肝)是经粪-口途径传播的急性病毒性肝炎，由戊型肝炎病毒(HEV)感染所致。1986-1988年我国新疆发生戊肝大流行，是世界上最大的一次戊肝爆发性流行，12万余人受到感染。

甲肝疫苗以及乙肝疫苗已经上市多年，这两种疫苗的生产技术及应用已经非常成熟。戊肝疫苗则尚在研制中。HEV由于细胞培养非常困难，因此目前难以研制灭活疫苗或减毒活疫苗，国内外的研究大都集中于通过基因重组技术来研制基因工程亚单位疫苗。

含有两种或两种以上抗原、可以预防两种或两种以上疾病的联合疫苗的研究一直受到众多学者关注，并以其方便、多效、低成本成为新一代疫苗研究的热点。与单一疫苗相比，联合疫苗可以减少疫苗的接种次数，避免因漏种而不能得到全程免疫；另外，疫苗大多不耐热，其生产、运输、储存、销售乃至全部使用过程均需在较低温度下进行，即所谓的“冷链”，这种环环相扣的冷链运作，费用极高，使疫苗成本居高不下。而使用联合疫苗，则可以大大降低冷链运作的费用，因此具有显著的优越性。百日咳-白喉-破伤风三联疫苗在计划免疫中已使用多年即为一成功之例。近年来一些新的联合疫苗如甲肝和乙肝联合疫苗也已经获得专利(欧洲专利0339 667)。但是，作为病毒性肝炎的甲型肝炎-乙型肝炎-戊型肝炎联合疫苗(HAV-HBV-HEV联合疫苗)的研制迄今为止在国内外尚未见报道。

三、发明内容

本发明提供一种方便、多效、低成本、并能够有效预防人及动物甲肝、乙肝、戊肝的HAV-HBV-HEV联合疫苗及其制备方法。

本发明技术解决方案为：一种HAV-HBV-HEV联合疫苗，包括灭活甲肝抗原以及重组乙肝抗原和重组戊肝抗原。其灭活HAV含量为200-1000U/mL，优选剂量为500U/mL；其重组HBsAg为10-40μg/mL，优选剂量为20μg/mL；其戊型重组肝炎病毒蛋白的含量为10-50μg/mL，优选剂量为20μg/mL。

制备方法为：在制备最终的HAV-HBV-HEV联合疫苗之前，将灭活HAV吸附于氢氧化铝凝胶，将重组HBsAg吸附于氢氧化铝凝胶，将重组HEV蛋白吸附于氢氧化铝凝胶，调整pH至5.5-9.6；将调整了pH的上述组份混合。

与现有技术相比，本发明具有如下优点：

本发明的HAV-HBV-HEV联合疫苗可以有效的用于预防人和动物的甲肝、乙肝和戊肝。动物实验表明，与单价灭活甲肝疫苗、单价重组乙肝疫苗和单价重组戊肝疫苗相比，HAV-HBV-HEV联合疫苗能够明显增加重组HBsAg和重组HEV蛋白的免疫原性；而联合疫苗诱导的甲肝抗体水平与单价灭活甲肝疫苗无明显区别。因此本发明提供的联合疫苗具有单价疫苗同样甚至更好的免疫原性。

本发明的联合疫苗中使用了经充分证明具有良好安全性及免疫原性的灭活HAV和重组HBsAg。此外，以往的研究已经证实，本研究组制备的重组HEV蛋白同样具有良好的安全性和免疫原性，可以用于戊肝疫苗的研制。因此本发明的联合疫苗不仅在技术上可行，而且由于联合疫苗具有方便、多效、低成本的优点，所以本发明能够大大降低病毒性肝炎疫苗的生产成本和市场价格，提高疫苗的覆盖率。

四、具体实施方式

实施例中甲型肝炎-乙型肝炎-戊型肝炎联合疫苗以HAV-HBV-HEV联合疫苗表示。

实施例1

一种HAV-HBV-HEV联合疫苗，包括灭活甲肝抗原以及重组乙肝抗原和重组戊肝抗原。其灭活HAV含量为200-1000U/mL，优选剂量为500U/mL；其重组HBsAg为10-40μg/mL，优选剂量为20μg/mL；其戊型重组肝炎病毒蛋白的含量为10-50μg/mL，优选剂量为20μg/mL。

本实施例还包括免疫佐剂，该免疫佐剂为氢氧化铝凝胶溶液，氢氧化铝凝胶的浓度范围调整为0.6-1.5mg/mL，优选浓度为1.0mg/mL。