[发明专利]盐酸克伦特罗快速检测试剂盒及其制造方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种快速检测家畜体内盐酸克伦特罗含量的试剂盒以及该试剂盒的制造方法。

背景技术

盐酸克伦特罗(HCl-clenbuterol)简称克伦特罗，商品名称为克喘素、息喘宁、舒喘宁、平喘素、安喘素及瘦肉精，是选择性β2-肾上腺素受体激动剂。它是白色或类白色的结晶性粉末，无臭，味苦，具有调节动物神经兴奋及其体内营养素重分配的功能。其化学性质稳定，加热至172℃时才分解，一般方法不能将其破坏。肠道吸收快，作用时间持久，药理作用强。畜种作用范围广泛、药效强劲、选择性高、易吸收、固定难分解、溶化。

克伦特罗开始使用是作为治疗哮喘的兽药，它可引起交感神经兴奋，在治疗剂量下，能强而持久地松弛支气管平滑肌，从而治疗哮喘。后来在猪、牛、羊等肉畜饲料中添加应用，减缓或减少脂肪沉积，增加肌肉蛋白沉积，使营养重新分配，从而改善肉畜胴体品质(提高瘦肉率、减少脂肪率)。克伦特罗能激动脂肪组织的β-肾上腺素受体，使脂肪激酶活化，促进甘油三酯分解成游离脂肪酸和甘油，动物体内脂肪动用产热，基础代谢水平提高。

克伦特罗在家畜和人体内吸收好，而且与其它β-兴奋剂相比，它的生物利用度高，以至食用了含有克伦特罗的家畜肉出现中毒。Zimmer(1976)证实人内服20μg的14C-盐酸克伦特罗，峰浓度时，血浆中克伦特罗原形药占总的14C-盐酸克伦特罗的75％。克伦特罗内服生物利用度高的事实对估计消费者食用了含有克伦特罗的组织，从中获得的克伦特罗的量很重要。引起人中毒的动物组织含有克伦特罗原形药的量差异很大。Martinez-Navarro(1990)报道犊牛肝中克伦特罗原形药的残留量为161～291ppb，Pulce等(1991)报道犊牛肝中克伦特罗的残留量为375～500ppb，Salleras等(1995)报道犊牛肝中克伦特罗的残留量为19～5395ppb。此外，Maistro等(1995)报道犊牛肌肉中克伦特罗的残留量为500ppb。

盐酸克伦特罗的应用对动物有害，在饲用初期会在短期内出现如下症状：血压升高、血管扩张、心率加快、呼吸加剧、体温上升、心脏和肾脏负担加重等剧烈反应，并出现采食下降、行为动作失调、神经紧张不安甚至全身震颤等症状。而且动物长期饲用会使机体内部受体数目减少，失去对盐酸克伦特罗的敏感性，导致动物自身促肌肉生长效应逐渐丧失，只有连续使用才会保持已获得的效果。虽然定期停药可恢复机体对盐酸克伦特罗的敏感性，但它使已获得的效果迅速丢失，直接损伤肉畜的机体。

人食用了含有克喘素等盐酸克伦特罗残留的肉食，会出现类似于动物甚至比动物更严重的症状。它可引起血压升高、血管扩张、心跳加快、呼吸加剧、体温升高、肌肉颤抖，使患者产生头痛、胸闷、神经过敏、肌肉痛疼、心悸、恶心、呕吐等症状。更为严重的是它可诱发和加重心率失常病人的病情，引起心室早搏，四肢、脸、颈部骨骼肌震颤。另外还引起代谢紊乱，产生酮体，对糖尿病人可发生酸中毒或酮中毒。盐酸克伦特罗对人体危害的持续时间较长，虽然目前未有中毒患者死亡的报道，但给患者的精神、健康及正常生活工作造成了严重危害。

我国政府严令申明不得在家畜的饲料及其他添加物中使用盐酸克伦特罗，并且通过相关政策手段对相关领域进行行政干预和抽检。

发明内容

本发明的目的是克服现有检测技术中存在的不足，提供一种操作简单、方便，不需要依靠专业仪器和专业人士就能定性检测家畜体内盐酸克伦特罗含量水平的试剂盒。

本发明的另一目的则是提供一种上述试剂盒的制备方法。

按照本发明提供的技术方案，在检测试剂盒中包含用于支撑整个检测系统的塑料外壳、位于外壳内的用于支撑反应体系的PVC板条，在PVC板条上设置用于提供层析系统的吸水纸及用于吸附反应物的硝酸纤维素膜和玻璃纤维及反应物；所述反应物包括盐酸克伦特罗-BSA0.5～1.5mg/l，抗猪-IgG抗体0.8～2mg/l、盐酸克伦特罗-BSA抗体—染料复合物0.5～2mg/l。

在PVC板条上设置两条吸水纸，在两条吸水纸之间的PVC板条上设置硝酸纤维素膜，该硝酸纤维素膜的一端与一条吸水纸接触，另一端与位于PVC板条上的玻璃纤维接触，该玻璃纤维的另一端与另一条吸水纸接触，在硝酸纤维素膜上吸附有相互隔开的盐酸克伦特罗-BSA抗体与抗猪-IgG抗体。

盐酸克伦特罗快速检测试剂盒的制造方法包含如下步骤：

(一)反应物制备