[发明专利]D－乳酸诊断/测定试剂盒及D－乳酸浓度测定方法

权利要求书

1.一种具有D-乳酸特异性的酶循环扩增法、酶比色法及酶联法技术的D-乳酸浓度测定方法，其方法原理如下：

D-乳酸+2高铁细胞色素c D-乳酸脱氢酶丙酮酸+

                                     2亚铁细胞色素c

丙酮酸+氨离子+还原型辅酶丙氨酸脱氢酶L-丙氨酸

                                     +水+辅酶

丙氨酸+水+氧甘氨酸氧化酶氨离子+丙酮酸+

                                     过氧化氢

过氧化氢+还原型色原体组合过氧化物酶吲嗒胺色原或

                                     醌亚胺色原+水

将最终反应物置于可见光分析仪下，检测400-700nm处直接反映吲嗒胺色原或醌亚胺色原含量高低的光吸收速度/程度，得出D-乳酸浓度大小测定结果。

2.一种D-乳酸诊断/测定试剂盒，主要成分包括：

缓冲液            20-500mmol/L

稳定剂            1-4000mmol/L

还原型辅酶        0.1-0.35mmol/L

2高铁细胞色素c    1-50mmol/L

氨离子            1-50mmol/L

D-乳酸脱氢酶      1000-80000U/L

丙氨酸脱氢酶      1000-80000U/L

甘氨酸氧化酶      1000-80000U/L

过氧化物酶        500-80000U/L

还原型色原体组合  0.1-20mmol/L

其特征在于：试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

3.根据权利要求2所述D-乳酸诊断/测定试剂盒，其特征在于：

由缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、2高铁细胞色素c、氨离子、D-乳酸脱氢酶、丙氨酸脱氢酶、甘氨酸氧化酶、过氧化物酶、还原型色原体组合组成单剂试剂。

4.根据权利要求2所述D-乳酸诊断/测定试剂盒，其特征在于：

由缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、2高铁细胞色素c、氨离子、D-乳酸脱氢酶、丙氨酸脱氢酶、甘氨酸氧化酶、过氧化物酶、还原型色原体组合组成双剂试剂；试剂1，由缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、2高铁细胞色素c、氨离子、还原型色原体组合组成；试剂2，由缓冲液、稳定剂、D-乳酸脱氢酶、丙氨酸脱氢酶、甘氨酸氧化酶、过氧化物酶、还原型色原体组合组成。过氧化物酶、还原型色原体组合、还原型辅酶、2高铁细胞色素c、氨离子、D-乳酸脱氢酶、丙氨酸脱氢酶、甘氨酸氧化酶在试剂1或试剂2中的位置可以不限。

5.根据权利要求2所述D-乳酸诊断/测定试剂盒，其特征在于：

由缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、2高铁细胞色素c、氨离子、D-乳酸脱氢酶、丙氨酸脱氢酶、甘氨酸氧化酶、过氧化物酶、还原型色原体组合组成多剂试剂；试剂1，由缓冲液、稳定剂、还原型辅酶、2高铁细胞色素c、氨离子、还原型色原体组合组成；试剂2，由缓冲液、稳定剂、丙氨酸脱氢酶、甘氨酸氧化酶、过氧化物酶、还原型色原体组合组成；试剂3，由缓冲液、稳定剂、D-乳酸脱氢酶组成。过氧化物酶、还原型色原体组合还原型辅酶、2高铁细胞色素c、氨离子、D-乳酸脱氢酶、丙氨酸脱氢酶、甘氨酸氧化酶在试剂1、试剂2或试剂3中的位置可以不限。

6.根据权利要求2所述D-乳酸诊断/测定试剂盒，其特征在于：还包括稳定剂1-4000mmol/L或0.1％-100％体积比。所述稳定剂为：硫酸铵(Ammonia Sulfate)、甘油(Glycerol)、丙二醇(Propylene Glycol)、乙二醇(Ethylene glycol)及防腐剂中的至少一种。

7.根据权利要求2所述D-乳酸诊断/测定试剂盒，其特征在于：所述还原型色原体组合可以是下列28个组合中的任一个配对组合：

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

石碳酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

N，N-双乙基-m-甲苯胺

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

2，4-双氯石碳酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

2，4，6-仨溴-3-羟基-苯磺酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

3，5-双氯石碳酸磺酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

3，5-双氯-2-羟基-苯磺酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺钠盐

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

仨溴羥基苯甲酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

双甲基苯胺

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

2，2’-AZINO-双(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

4-羥基-3-甲氧基苯甲酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

3-甲基-乙基-羥基苯胺

4-氨基抗砒

石碳酸

4-氨基抗砒

N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺

4-氨基抗砒

N，N-双乙基-m-甲苯胺

4-氨基抗砒

2，4-双氯石碳酸

4-氨基抗砒

2，4，6-仨溴-3-羟基-苯磺酸

4-氨基抗砒

3，5-双氯石碳酸磺酸

4-氨基抗砒

3，5-双氯-2-羟基-苯磺酸

4-氨基抗砒

N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺钠盐

4-氨基抗砒

仨溴羥基苯甲酸

4-氨基抗砒

双甲基苯胺

4-氨基抗砒

N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺

4-氨基抗砒

2，2’-AZINO-双(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)

4-氨基抗砒

4-羥基-3-甲氧基苯甲酸

4-氨基抗砒

3-甲基-乙基-羥基苯胺