[发明专利]一种交替假单胞菌产低温碱性蛋白酶的方法及产品

说明书

技术领域

本发明涉及一种分离自连云港海域的交替假单胞菌HH407菌株CCTCCN0：M 2070009(已于2007年1月29日保藏在中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号为CCTCC N0：M 207009)；本发明还涉及该菌株产低温碱性蛋白酶的方法及产品。

背景技术

低温酶在低温下有着比中温酶更高的催化效率，能起到工业加工中降低能耗的作用，因此在洗涤剂、纺织工业、食品工业、酿造和白酒工业、饲料加工、生物转化及环境生物治理等方面具有广泛的应用前景。从海洋微生物中筛选具有应用价值的低温酶类，已成为海洋生物资源开发的重要途径。

碱性蛋白酶是加酶洗涤剂的主要添加剂，目前洗衣粉中主要添加的是中温碱性蛋白酶。这类酶一般最适酶活通常在50℃以上，所以要达到最佳洗涤效果，就要加热水。而低温酶最适酶活一般在40℃以下，可以直接室温洗涤，节省能源，并在食品制造、制革、丝绸、环保、医药等领域显示出广泛的应用前景。

国内外对低温碱性蛋白酶的研究报道较多，其产酶菌株主要为假单胞菌属(Pseudomonas)、黄杆菌属(Flavobacterium)、气单胞菌属(Aeromonas)、希瓦氏菌属(Shewanella)和弧菌属(Vibrio)。目前国内外均没有Pseudoalteromonas.favipulchra产低温碱性蛋白酶的文献报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，通过选育一种新的海洋嗜冷菌交替假单胞菌属flavipulchra菌来生产低温碱性蛋白酶，本发明所要解决的另外的技术问题是研究该菌株的生长特性，及其产低温碱性蛋白酶的方法和酶的产品。

本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。

本发明的特征包括交替假单胞菌HH407(Pseudoalteromonas flvipulchraHH407)菌株本身，以及利用该菌株产低温碱性蛋白酶的方法，以及利用该菌株所产的低温碱性蛋白酶产品。

本发明所涉及的菌株是一株分离自连云港海域的海洋细菌嗜冷菌交替假单胞菌HH407(Pseudoalteromonas flavipulchra HH407)，并于2007年1月29日在中国典型培养物保藏中心CCTCC保藏，其保藏编号为CCTCC N0：M 207009。

一、本发明菌株的特征和生长特性

1、形态观察：分别对菌株进行光学显微镜和电镜(南京农业大学)观察。

2、菌株的生长特性

2.1种子液的制备：将保藏在2216E培养基的斜面菌株接种到发酵培养基中，转速180r/min，装液量20％，培养16h。

2.2温度对生长的影响：种子液2％接种于发酵培养基，pH自然，转速180r/min，装液量20％，分别在不同温度下培养，测定细胞浓度。

2.3pH对生长的影响：在发酵培养基中加入下列不同的缓冲液(10mM)，在分别调节发酵培养基的pH：pH 5.0-6.0(MES)，pH 7.0(PIPES)，pH 7.5-8.5(HEPES)，pH 9.0-11.0(不加缓冲液)，在20℃培养24小时，其他条件同

2.2，测定细胞浓度。

2.4NaCl对生长的影响：在发酵培养基(将用海水配置改用微量矿物盐溶液代替，每升培养基加入10ml)中加入NaCl，使之为0％到13％的NaCl，在20℃培养24小时，其他条件同2.2，测定细胞浓度。

2.5对碳氮源的利用：碳源实验：在基本培养基中加入不同的终浓度为0.5％的碳源物质(糖类、有机酸类、醇类及氨基酸类)代替葡萄糖；氮源实验：在基本培养基中加入不同的终浓度为0.2％的氮源物质(酵母膏等)代替蛋白胨。对照为基本培养基，20℃、180r/min振荡培养，每隔12h测定细胞浓度，直至测定细胞浓度下降为止。

2.6细胞浓度的测定：采用petroff-Hausser细菌计数板在Olympus相差显微镜测定。

3、关于本发明中的培养基。

2216E培养基(g/L)：蛋白胨5，酵母粉1，海水配置，pH8.5；

酪蛋白培养基(g/L)：干酪素10，海水配置，pH10.0；

基本培养基(g/L)：蛋白胨0.5，葡萄糖0.5，海水配置，pH8.5；

发酵培养基(g/L)：蛋白胨5，酵母粉3，葡萄糖5，海水配置，pH8.5