[发明专利]一种交替假单胞菌产低温碱性蛋白酶的方法及产品

权利要求书

1、一种交替假单胞菌HH407(Pseudoalteromonas flavipulchra HH407)CCTCC NO：M 207009。

2、根据权利要求1所述的一种交替假单胞菌HH407 CCTCC NO：M207009，该菌株具有以下特征：该菌能够在0℃下生长，该菌的生长温度范围为0-35℃，最适生长温度为20℃；生长pH范围为5.5-11，最适生长pH为8.5；生长的NaCl浓度为0.5％-13％，最适生长的NaCl浓度为4％，无NaCl不生长，属于典型海洋嗜冷的中度嗜盐微生物；该菌能利用胰蛋白胨、酵母膏、蛋白胨、纤维二糖、淀粉、明胶、乙酸、柠檬酸、甲醇和乙醇。

3、一种利用权利要求1或2所述的一种交替假单胞菌HH407 CCTCCNO：M 207009产低温碱性蛋白酶的方法，其特征在于，其步骤如下，

(1)取1环斜面菌株接种到含有50ml发酵培养基的250ml三角瓶中，180r/min，20℃，培养16h；按2％接种量接入发酵培养基中，180r/min，20℃，培养36h；

(2)将培养好的发酵液10000r/min，离心10min，上清液加入60％硫酸铵，静置3h后，10000r/min离心30min，用适量pH为8.0的Tris缓冲液溶解，然后4℃透析24h；再经过DEAE-sepharose Fast Flow和Sephacryl S-200方法得到低温碱性蛋白酶。

4、一种按权利要求3所述方法所产低温碱性蛋白酶，其特征在于，该低温碱性蛋白酶具有以下特征：

(1)酶最适作用温度为35℃，在0℃仍有22％的催化效率；酶在25℃、35℃、45℃稳定，保温60min，酶活均在80％以上，55℃保温30min损失55％的酶活；是一种低温的蛋白酶；

(2)酶的最适作用pH为10.0，在pH9.0-11相对酶活力在80％以上，pH5-12均有酶活；酶的最稳定pH为9.0；是一种碱性的蛋白酶；

(3)Sr²⁺、Ba²⁺、Cu²⁺、Mn²⁺、K⁺对酶有激活作用，Hg²⁺、Al³⁺、Zn²⁺、Ni²⁺、Co²⁺、Fe³⁺、Li²⁺有抑制作用；

(4)PMSF抑制酶活，EDTA仍有106.6％的酶活，表明它是一种丝氨酸蛋白酶；H₂O₂、β-Mercaptoethanol、Urea和DTT能提高酶活，分别提高4.8％、8.2％、20.1％、83.3％，酶对SDS有耐受性，0.1％SDS对酶活无影响，表面活性剂Tween20、Tween80、Triton X-100对酶活有促进作用。