[发明专利]4,5－二羟基－2－甲氧基苯甲醛及其发酵法制备和应用

说明书

技术领域

4，5-二羟基-2-甲氧基苯甲醛及其发酵法制备和应用，属于生物发酵及生化分离技术领域。本发明涉及从鸡腿蘑液体发酵液分离获得一种新的化合物4，5-二羟基-2-甲氧基苯甲醛，它具有式(I)的化学结构，本发明还涉及该物质防治糖尿病的应用。

背景技术

鸡腿蘑(Coprinus Comatus)，学名毛头鬼伞，被联合国粮农组织(FAO)和世界卫生组织(WHO)确定为具“天然、营养、保健”三种功能为一体的16种珍稀食用菌之一。现代研究表明，鸡腿蘑具有降低血糖、防止肝损伤、抗肿瘤、提高机体免疫力等功效。

糖尿病是一种常见多发的慢性代谢性疾病，千百年来它一直严重危害着人类的健康与生命。高血糖引起的一系列代谢紊乱是造成糖尿病血管病变的主要因素，多年来的研究表明其机理是通过多种途径介导的，其中蛋白质非酶糖基化反应是主要因素之一。该反应最终可形成一系列不可逆的糖基化终产物(Advanced glycosylation end products，AGEs)。在糖尿病患者体内，随着AGEs反应的发生和加速，会导致胶原蛋白发生交联耦合、心室隔膜增厚及动脉硬化，从而引起一系列病理生理改变。因此，抑制和减少AGEs的形成也是近年来糖尿病研究中的热点问题之一。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种化合物(I)4，5-二羟基-2-甲氧基苯甲醛。

本发明的目的之二在于提供化合物(I)的制备方法。

本发明的目的之三在于提供化合物(I)在制备治疗和防治糖尿病疾病药物或保健品方面的应用。

本发明的技术方案：化合物4，5-二羟基-2-甲氧基苯甲醛，化学结构式如下：

化合物(I)

本发明所述的化合物(I)的制备方法为：

步骤1：将鸡腿蘑发酵液3000转/分钟的条件下离心20分钟，取上清液用AB-8型大孔树脂层析柱吸附，吸附结束后，用超纯水洗脱除去蛋白质、多糖，直至流出液测不出糖和蛋白，然后用10倍柱体积20％体积浓度的乙醇洗脱，收集洗脱液浓缩、冷冻干燥，所得组分称为M1；

步骤2：将步骤1中冷冻干燥的M1组分用超纯水溶解后用C18低压层析柱分离，每次上样量为5～8mg，用0.5∶9.5-8∶2的甲醇-水梯度洗脱，流速2mL/分钟，紫外检测器280nm检测，收集到4个组分，按出峰顺序取第3个组分浓缩、冷冻干燥，所得组分称为M1-3；

步骤3：将步骤2中冷冻干燥的M1-3组分用超纯水溶解后用C18中压层析柱分离，每次上样量为0.5～1mg，用0.5∶9.5-6∶4的甲醇-水梯度洗脱，流速1.0～1.6mL/分钟，紫外检测器280nm检测，根据出峰情况收集主峰物质，浓缩、冷冻干燥，所得组分称为M1-3-1；

步骤4：将步骤3中冷冻干燥的M1-3-1组分按步骤3的柱层析分离和收集条件重复一次，所收集到的物质即为化合物4，5-二羟基-2-甲氧基苯甲醛。

化合物(I)的结构分析：经分析，化合物(I)确定为4，5-二羟基-2-甲氧基苯甲醛(4，5-Dihydroxy-2-Methoxy-Benzaldehyde)。HR MS m/z：168.0426(计算值：168.0423)，分子式：C₈H₈O₄。MS m/z：167，165，146，139，137，125，121，109，107。UVλmax：206，232，287。IR(KBr)cm^-1：3411.88，3230.09，2925.79，1630.50，1601.12，1486.15，1453.42，1384.80，1229.39，1161.62，1079.46。化合物(I)核磁共振图谱分析如下：

由¹HNMR(CD3OD)分析可得以下信息：化学位移信号δ3.74(s，3H，-OCH₃)显示有一个甲氧基，δ6.5～6.0ppm的多重峰显示有苯基存在，且多重峰的耦合常数j＜1则表明两个芳氢质子应为对位取代，δ10.06则可以推断该结构具有醛基，10.06ppm为醛基的化学位移。

结合¹³CNMR(CD3OD)分析：δC192.25和δC61应为-CHO和-OCH₃的信号，δC：111.58ppm、107.96ppm、149.21ppm、165.78ppm、101.7g ppm、166.13ppm为苯基的化学位移。