[发明专利]一种枇杷叶药材的质量评价方法

说明书

技术领域

本发明涉及枇杷叶药材的鉴别及质量评价方法，具体地说是用指纹图谱来鉴别和评价枇杷叶质量的方法，尤其涉及用高效毛细管电泳指纹图谱或高效液相色谱指纹图谱鉴别枇杷叶真伪和质量稳定的方法。

背景技术

枇杷叶为蔷薇科植物枇杷Eriobotrya japonica(Thunb.)Lindl.的干燥叶，是常用大宗中约材，具有清肺止咳，降逆止呕等功效，用于肺热咳嗽，气逆喘急，胃热呕逆，烦热口渴等(国家药典委员会编.中华人民共和国药典.第一部.北京：化学工业出版社，2005：142)。近年来大量研究发现(林玉霖，林文津，林立强.枇杷叶研究现状与开发前景，中药材.2006，29(10)：1111-1114)，枇杷叶的主要活性成分有熊果酸、齐墩果酸、苦杏仁甙、皂苷类、多糖类等，具有止咳、祛痰、抗炎、保肝、止痛、抗肿瘤及调节免疫等多种药理作用；临床可用于治疗呼吸道炎症、风湿性关节炎、肾小球肾炎、过敏性紫癜、荨麻疹、湿疹及高血糖等病症。

有关枇杷叶的质量标准，2005年版《中国药典》一部只检查简单的性状、理化鉴别及水溶性浸出物，尚未对有效成分的检测做出规定。目前已有文献报道用HPLC法测定枇杷叶药材指纹图谱的研究(张吕浩，吴松吉，朱延萍，等.枇杷叶高效液相指纹图谱研究.时珍国医国药.2007，18(2)：269-271)。但由于不同区域枇杷叶的质量差异较大，针对福建省地道药材枇杷叶的高效液相色谱指纹图谱未见报道。

毛细管电泳是一种高效分离技术，具有高效、快速、进样体积小、溶剂消耗少和抗污染能力强等特点，在中药有效成分分析、指纹图谱研究方面显示出显著的优势(马欣，孙毓庆.银杏叶提取物的毛细管电泳指纹图谱研究.中草药，2004，35(8)：876-878)。目前，未见采用毛细管电泳指纹图谱鉴别及评价枇杷叶药材质量的报道，本申请人对不同产地枇杷叶进行了考察比较，于2002年在福建莆田建成枇杷叶GAP示范种植基地，实行GAP管理。为建立枇杷叶药材质量的综合评价方法，特以国家食品药品监督管理局2000年颁发的关于中药注射剂指纹图谱技术要求，对福建枇杷主栽品种及枇杷叶GAP基地的10批以上枇杷叶药材进行了测定，建立了福建地道药材枇杷叶指纹图谱测定方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种用指纹图谱鉴别和评价枇杷叶药材质量的方法，并可将其用于枇杷叶质量控制及其真伪鉴别的指标之一。

本发明通过下列步骤实施：

第一步，先建立枇杷时的标准指纹图谱，主要步骤包括：

(a)采集10批次以上具代表性的枇杷叶药材，并鉴定其品种及质量。

(b)枇杷叶药材标准品溶液的制备：取枇杷叶药材，粉碎，过筛，干燥至恒重。精密称取枇杷叶粉末适量，用醇性溶剂(C数小于5，优选为甲醇或正丁醇)超声提取2～3次，合并提取液。滤过，滤液浓缩后，加醇性溶剂(C数小于5，优选为甲醇或正丁醇)或者流动相稀释至一定浓度，摇匀，即得。进样前用微孔滤膜滤过。

采用高效毛细管电泳色谱法测定的指纹图谱，其枇杷叶药材标准品溶液的具体制备优选的步骤为：取枇杷叶粉末(过四号筛)约1g，精密称定，加30倍量正丁醇，静置15min，超声提取3次，每次30min，滤过，取滤液，加热挥去溶剂，用甲醇溶解，移至5ml量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀；即得。

采用高效液相色谱法测定的指纹图谱，其枇杷叶药材标准品溶液的具体制备过程为：取枇杷叶药材，粉碎，过四号筛，粉末60℃干燥至恒重。精密称取枇杷叶粉末1g，置50ml量瓶中，用甲醇30ml超声提取2次，每次30min，合并提取液。滤过，滤液在水浴上浓缩，移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

(c)参照物溶液的制备：参照物为枇杷叶中的有效成分，优选为三萜酸类化合物，更优选为熊果酸。其供试液具体制备方法为：精密称取熊果酸对照品5mg置于10ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释到刻度，摇匀，即得。

(d)测定方法的选择：测定方法为色谱法，优选为高效毛细管电泳法(HPCE)或高效液相色谱法(HPLC)。

(f)测定：精密吸取枇杷叶药材标准品溶液及参照物溶液，分别注入检测仪器，测定枇杷叶标准指纹图谱。

采用高效毛细管电泳色谱法测定的指纹图谱，其优选的条件为：毛细管柱(60cm长，50μm内径)；缓冲液：(0.1mol/L硼酸溶液∶0.2mol/L氢氧化钾溶液＝4∶2)；分离电压：20kV；实验温度：25℃；检测波长为200nm。理论板数按熊果酸峰计算不低于3000。