[发明专利]检测烟草病毒系列免疫胶体金试剂及其制备方法无效
| 申请号： | 200710008891.5 | 申请日： | 2007-04-26 |
| 公开（公告）号： | CN101294963A | 公开（公告）日： | 2008-10-29 |
| 发明（设计）人： | 吴祖建;林志铿;谢联辉;谢荔岩 | 申请（专利权）人： | 福建农林大学 |
| 主分类号： | G01N33/569 | 分类号： | G01N33/569;G01N33/544;G01N33/532;G01N33/52 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 350002福建*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 烟草 病毒 系列 免疫 胶体 试剂 及其 制备 方法 | ||
1、检测TMV病毒的免疫胶体金试纸条的制备方法，包括以下步骤：
(1)多克隆抗体：取纯化的烟草花叶病毒注射兔子，采血，取血清，提纯抗体IgG，纯度＞95％；
(2)胶体金：将100ml0.01％氯化金用2-3ml的1％柠檬酸三钠还原成15nm-40nm的颗粒溶液；
(3)TMV免疫胶体金溶液：用0.1mol/L K2CO3将胶体金溶液的pH值调至7-8，将胶体金溶液按100ml胶体金溶液中加入0.5mg-2mg步骤(1)的TMV多克隆抗体，混合均匀，得TMV免疫胶体金溶液；
(4)将上述的TMV免疫胶体金溶液点到玻璃纤维上，形成TMV胶体金；
(5)将TMV多克隆抗体溶液和羊抗兔多克隆抗体，分别点在硝酸纤维膜的不同位置上；
(6)将滤样纸、胶体金、硝酸纤维素膜和吸水纸依次粘贴到一张不干胶的胶板上，然后切割成试纸条；
(7)真空干燥：真空泵内的温度控制在15-25℃；真空干燥的时间控制在2-5小时；真空泵内的大气压不高于0.1毫巴。
2、根据权利要求1的方法制备的检测TMV病毒的免疫胶体金试纸条。
3、检测CMV病毒的免疫胶体金试纸条的制备方法，包括以下步骤：
(1)多克隆抗体：取纯化的黄瓜花叶病毒注射兔子，采血，取血清，提纯抗体IgG，纯度＞95％；
(2)胶体金：将100ml 0.01％氯化金用2-3ml的1％柠檬酸三钠还原成15nm-40nm的颗粒溶液；
(3)CMV免疫胶体金溶液：用0.1mol/L K2CO3将胶体金溶液的pH值调至7-8，将胶体金溶液按100ml胶体金溶液中加入0.5mg-2mg步骤(1)的CMV多克隆抗体，混合均匀，得CMV免疫胶体金溶液；
(4)将上述的CMV免疫胶体金溶液点到玻璃纤维上，形成CMV胶体金；
(5)将CMV多克隆抗体溶液和羊抗兔多克隆抗体，分别点在硝酸纤维膜的不同位置上；
(6)将滤样纸、胶体金、硝酸纤维素膜和吸水纸依次粘贴到一张不干胶的胶板上，然后切割成试纸条；
(7)真空干燥：真空泵内的温度控制在15-25℃；真空干燥的时间控制在2-5小时；真空泵内的大气压不高于0.1毫巴。
4、根据权利要求3的方法制备的检测CMV病毒的免疫胶体金试纸条。
5、检测PVY病毒的免疫胶体金试纸条的制备方法，包括以下步骤：
(1)多克隆抗体：取纯化的马铃薯Y病毒注射兔子，采血，取血清，提纯抗体IgG，纯度＞95％；
(2)胶体金：将100ml 0.01％氯化金用2-3ml的1％柠檬酸三钠还原成15nm-40nm的颗粒溶液；
(3)PVY免疫胶体金溶液：用0.1mol/L K2CO3将胶体金溶液的pH值调至7-8，将胶体金溶液按100ml胶体金溶液中加入0.5mg-2mg步骤(1)的PVY多克隆抗体，混合均匀，得PVY免疫胶体金溶液；
(4)将上述的PVY免疫胶体金溶液点到玻璃纤维上，形成PVY胶体金；
(5)将PVY多克隆抗体溶液和羊抗兔多克隆抗体，分别点在硝酸纤维膜的不同位置上；
(6)将滤样纸、胶体金、硝酸纤维素膜和吸水纸依次粘贴到一张不干胶的胶板上，然后切割成试纸条；
(7)真空干燥：真空泵内的温度控制在15-25℃；真空干燥的时间控制在2-5小时；真空泵内的大气压不高于0.1毫巴。
6、根据权利要求5的方法制备的检测PVY病毒的免疫胶体金试纸条。
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