[发明专利]用于原核表达系统表达外源蛋白的复合自动诱导培养基

说明书

技术领域

本发明涉及一种培养基，尤其涉及一种用于含有lac启动子、T7lac启动子控制的原核表达系统表达外源蛋白的复合自动诱导培养基，属于生物技术领域。

背景技术

DNA测序技术的成熟能够准确的提供来源于不同物种的数以万计蛋白质的编码序列。应用DNA重组技术能够把这些编码序列克隆到表达载体上，实现目的蛋白的表达。最近几年来，利用基因工程手段生产商业化的蛋白急剧增加，这些表达的重组蛋白已经在工业上以及医学上得到广泛应用。由于大肠杆菌具有遗传背景清楚、易操作、生长迅速、表达量高、以及培养成本低等优点，再加上多年来外源基因表达的经验使其在大多数科研与应用中成为高效表达异源蛋白最常用的原核表达系统。利用大肠杆菌成功表达的重组蛋白包括工业酶类(凝乳酶、淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶等)以及治疗性蛋白(非格司亭、生长激素、胰岛素、干扰素等)。另外据统计截止到2003年提交到蛋白质结构数据库(PBD)中的蛋白质有80％以上是利用了大肠杆菌表达系统。所以说蛋白质无论是理论上的研究还是工业化生产，大肠杆菌表达系统都具有举足轻重的地位。

随着对大肠杆菌表达系统研究的不断深入，现在已经设计出了一系列的与大肠杆菌相匹配的表达载体，如pET系列、pGEX系列等，其中pET表达系统是最为广泛使用的原核表达系统之一。截止到2003年提交到PBD中的蛋白质中，pET表达系统的使用占整个原核表达系统的90％以上。

pET表达系统采用了T7lac杂合启动子，一方面能够有效的启动目的蛋白的表达，还能够降低本底表达水平。但是这种原核表达系统的主流载体也存在一些不足。有研究表明，即使是使用这种表达系统表达外源蛋白时，当重组菌生长接近于饱和状态时，也会发生提前诱导的情况。这对于表达外源蛋白特别是对宿主菌有毒性的蛋白极为不利。有文献表明，当向处于生长期后期的培养基中加入1％的葡萄糖时，会阻止这种提前表达，Novagen公司的主页上就参考了这一研究结果，推荐向培养基中添加1％的葡萄糖来解决这一问题。尽管这种方法可以抑制提前表达，可是葡萄糖会使培养基变为酸性，这就影响稳定期的菌密度，有碍于外源蛋白的表达。

所以，找到一种既能高密度培养细菌，又能克服表达菌的提前表达，对于提高外源蛋白的表达量具有重要的意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种既能高效表达外源蛋白，又能实现自动诱导的复合培养基。

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：

一种用于原核表达系统表达外源蛋白的培养基，每升该培养基，主要由以下重量的各组分组成：

胰蛋白胨        10-40g

酵母提取物      5-20g

六水琥珀酸钠    0-8.1g

二水柠檬酸钠    0-1.5g

甘油            15-50g

葡萄糖          0.5g

乳糖            2g

磷酸氢二钠      3.55g

磷酸二氢钾      3.40g

氯化铵          2.68g

硫酸钠          0.71g

七水硫酸镁      0.50g

六水氯化铁      0.03g；

优选的，各组分的重量份是：

胰蛋白胨        20.0g

酵母提取物      10.0g

六水琥珀酸钠    5.40g

二水柠檬酸钠    0.30g

甘油            25.0g

葡萄糖        0.50g

乳糖          2.00g

磷酸氢二钠    3.55g

磷酸二氢钾    3.40g

氯化铵        2.68g

硫酸钠        0.71g

七水硫酸镁    0.50g

六水氯化铁    0.03g；

本发明复合培养基的中各原料均可从生物化学试剂公司购买得到。

本发明复合培养基可按照本领域常规方法配制而成，这些方法为本领域普通技术人员所通晓。