[发明专利]用于区分至少两个细胞群体的方法及其应用

权利要求书

1.用于区分和计数至少2个任选地存在于液体样品中的、具有特 定生物学特征的生物成分群体的方法，其包括

-使用3种不同的探针同时标记所述生物成分群体，所述探针是 可通过3种不同的标记物进行检测的或被使得可通过3种不同的标记物 进行检测，其中所述标记物中的两种标记物各呈现出发射光谱，所述发 射光谱相互重叠，而第三种标记物呈现出不与另外两种标记物的光谱重 叠的发射光谱，其中所述呈现出相互重叠的发射光谱的两种标记物被称 为重叠标记物或MC，所述第三种标记物被称为非重叠标记物或MnC，并 且所述不与另外两种标记物的光谱重叠的发射光谱被称为非重叠发射 光谱；

-使用任何合适的工具，在于所述非重叠标记物的发射光谱中选 择出的检测波段中测量非重叠标记物的总量qMnC；

-使用任何合适的工具，在对于所述重叠标记物的发射光谱而言 共同的检测波段中测量重叠标记物的总量qMC；

-确定非重叠标记物的总量对重叠标记物的总量的比率R，R＝ (qMnC)/(qMC)；

-使用任何工具绘制图，所述图显示出作为经由重叠标记物标记 的生物成分总量的函数的所述比率R，R＝f(qMC)；和/或

-使用任何工具，对所述图中存在的生物成分群体进行定量，

其中所述生物成分是真核细胞或原核细胞，或者两者的混合物， 或者所述细胞的碎片，或者细胞器，并且所述方法用于非诊断目的。

2.权利要求1的方法，其特征在于，所述液体样品是血液、尿、 离解的组织、骨髓、脑脊髓液、胸膜液、滑液或由单采血液成分术过程 而得到的产物。

3.权利要求1或2的方法，其特征在于，任选地存在于液体样品 中的生物成分是真核细胞或原核细胞，或者两者的混合物，或者所述细 胞的碎片。

4.权利要求1或2的方法，其特征在于，所述探针是抗体，或核 酸，或对核酸特异的染料，或酶底物，或者对蛋白质特异的标记物，受 体的配体或对离子环境敏感的标记物，或所靶向的生物成分的任何其他 特征性分子。

5.权利要求4的方法，其特征在于，所述核酸为DNA或RNA。

6.权利要求4的方法，其特征在于，所述抗体是单克隆或多克隆 的、天然或重组的、人或动物的抗体。

7.权利要求1的方法，其特征在于，用于使得探针可检测的标记 物是核酸的嵌入或非嵌入标记物，或者是对蛋白质特异的标记物或所靶 向的生物成分的任何其他特征性分子。

8.权利要求1的方法，其特征在于，所述标记物是荧光或非荧光 标记物。

9.权利要求7或8的方法，其特征在于，所述标记物选自Alexa 350，Alexa488，Alexa532，Alexa633， Alexa647，Alexa660，Alexa680，别藻蓝蛋 白，氨甲基香豆素乙酸，二氯荧光素(DCFH)， 二氢罗丹明(DHR)，“增强型GFP”(EGFP)，Fluo-3，，萤 光素，5-马来酰亚胺萤光素，异硫氰酸荧光素(FITC)，PerCP，r-藻 红蛋白，r-藻红蛋白-青色素5串列或或，r- 藻红蛋白-青色素5.5，r-藻红蛋白-青色素7，r-藻红蛋白-德克萨斯红 ，，罗丹明110，罗丹明123，S65L，S65T，异硫氰酸四甲 基罗丹明，德克萨斯红indo1，纳米晶体，Fura2，Fura 3，quin，DS Red，嵌入化合物。

10.权利要求7或8的方法，其特征在于，所述标记物选自溴化 乙锭，噻唑橙，噻唑蓝，硫黄素S，硫黄素T，硫黄素二乙基- 喹啉基噻菁碘化物(DEQTC)，33258，33342，34580，DAPI，碘化丙锭，派洛宁Y， 7-氨基放线菌素D(7AAD)，吖啶橙，金胺O，钙荧光素，新亚甲蓝， olamin-O，嗪750，Astra蓝，绿，

11.前述权利要求中任一项的方法用于区分至少2个具有特定特 征且任选地存在于液体样品中的生物成分群体的用途，其中所述生物成 分是真核细胞或原核细胞，或者两者的混合物，或者所述细胞的碎片， 或者细胞器，并且所述用途用于非诊断目的。