[发明专利]对生物传感器表面上的抗原的实时结合分析

说明书

优先权

本申请要求于2005年11月30日递交的美国系列号No. 11/290,036的优先权，No.11/290,036要求于2004年1月16日递交的 美国系列号No.10/399,940的优先权，No.10/399,940为于2001年10 月23日递交的PCT/US01/45455的继续申请，PCT/US01/45455为于 2001年8月15日递交的U.S.09/930,352(现在的专利号为No.7,094,595) 的部分继续申请，U.S.09/930,352要求于2001年7月3日递交的美国 系列号No.60/303,028、于2001年4月12号递交的美国系列号No. 60/283,314和于2000年10月30日递交的美国系列号No.60/244,312 的优先权。本申请还要求于2003年1月16日递交的PCT/US03/01298 的优先权，PCT/US03/01298为于2002年1月28日递交的美国系列号 No.10/059,060的继续申请，No.10/059,060为于2001年8月15日递 交的美国系列号No.09/930,352(现在的专利号为No.7,094,595)的部分 继续申请。本申请还要求于2003年1月16日递交的PCT/US03/01298 的优先权，PCT/US03/01298为于2002年1月28日递交的美国系列号 No.10/058,626的继续部分申请，No.10/058,626为于2001年8月15 日递交的美国系列号No.09/930,352(现在的专利号为No.7,094,595)的 部分继续申请。

技术领域

本发明涉及包括检测与抗体、抗体片段或噬菌体特异性结合的抗 原的生物传感器和方法的领域。

背景技术

检测噬菌体与哺乳动物细胞之间结合的能力是发现治疗性和诊断 性抗体的主要部分。鉴别潜在的治疗性和诊断性抗体的典型路线包括： (1)可溶性蛋白或细胞相关蛋白(以可溶性形式或在细胞上表达的形式) 的噬菌体展示和噬菌体淘选试验；(2)对可溶性蛋白进行的噬菌体 ELISA(对于细胞目标-所述细胞相关蛋白的肽或蛋白模拟物)；(3)所 述噬菌体基因组中的展示基因通过分子生物学技术亚克隆到表达可溶 性抗体片段的质粒中；(4)所述抗体片段随后进行表达和纯化；(5)一 旦经纯化，测试抗体片段在ELISA、FACS、Guava或FMAT中的细胞 功能性结合；(6)分析所述主要抗体片段(Lead antibody fragment)的结 合动力学；和(7)然后将所述最主要的抗体(top antibody lead)克隆到 完整的抗体表达载体中进行大规模生产，动力学分析和体内有效性模 型。

用于噬菌体和与细胞相关的蛋白目标的功能性结合分析的典型试 验包括完整的哺乳动物细胞或细菌细胞的酶联免疫吸附试验(ELISA)、 流式细胞术(荧光激活细胞分类仪，FACS)、Guava微型流式细胞术产 品(Guava Technologies，Hayward，CA)以及荧光微量分析技术(FMAT)。 ELISA具有较高的噬菌体背景结合，这是因为细胞很复杂且噬菌体具 有非特异性结合的趋势。在ELISA中的背景结合由于结合信号的倍增 而加强。细胞ELISA同样因为在步骤间需要许多清洗步骤而较难，如 果所述细胞为非粘附性的而在每次清洗间需要离心旋转，则所述清洗 步骤将是非常繁琐的。通常粘附性细胞必须固定，从而在手动清洗或 者洗板机清洗时，保持所述细胞吸附在所述ELISA板上。所述固定可 改变细胞上所述蛋白的天然表位。在FAC和Guava中的噬菌体结合同 样困难，这是因为每个噬菌体克隆需要经过纯化得到信号所需的足够 噬菌体。

目前，大多数研究者花费大量时间和精力克隆噬菌体上的片段和/ 或完整IgG展示，以研究与细胞的功能性结合。花费在鉴别潜在治疗 性抗体上的时间越多，则有效的治疗性抗体进入医学临床所需时间越 长。因此，在所述噬菌体展示领域需要鉴别抗体与哺乳动物细胞功能 性结合的快速路径。

发明内容