[发明专利]用于克服肿瘤细胞耐药性的基于蛋白质的载体系统

说明书

背景技术

在对实体肿瘤的治疗中耐药性的形成造成肿瘤学中的重大问题。 由于由肿瘤细胞排出的化学治疗物质增加使耐药性频繁发生。这种耐 药性形成的机制与P-糖蛋白(Pgp)的过表达有关[Krishna等人，(2000)， Eur.J.Pharm.Sci.11，265]。Pgp是一种ATP依赖性外排泵(efflux pump)， 其能够从肿瘤细胞主动排出药用物质。Pgp的过表达导致了细胞内化学 治疗剂的聚集减少，这样其细胞内浓度不足以获得抗肿瘤作用。为代 偿化学治疗剂聚集的减少，需要细胞生长抑制剂的剂量适应，即，剂 量增加，但是，由于与这样的增加伴随出现的是细胞生长抑制剂的毒 副作用，其受到限制。Pgp的过表达导致了所谓的多重耐药性[多药耐 药性，MDR]，其中，细胞不仅对最初的物质而且还对多种细胞生长抑 制剂有耐药性。这种现象相当大地限制了肿瘤化学疗法的成功。

在过去，已经开发出多种对抗肿瘤细胞耐药性的方法，最常研究 的方法是使用用作Pgp抑制剂的活性剂。在1981年就已经确定了钙拮 抗剂对Pgp的抑制作用[Tsuruo等人，(1981)，Cancer Res.41，1967]。在 这些研究中，当将长春花新碱耐药性P388肿瘤细胞另外用钙离子拮抗 剂培养时，观察到在这些细胞中长春花新碱和阿霉素的聚集增加。异 搏定被证实是钙离子拮抗剂的活性剂组中的一个有价值的成员。但是， 如能够显示的是，如环孢菌素A的其它活性剂也是Pgp的强效抑制剂 [Slater等人，(1986)，J.Clin.Invest.77，1405]。在这些研究中，通过同时 施用环孢菌素A能够克服急性淋巴白血病细胞对长春花新碱和柔红霉 素的耐药性。

由于异搏定和环孢菌素A均具有许多潜在的副作用，探寻了其它 的Pgp抑制剂。因此，在体外试验中使用两种Pgp抑制剂MS-209和 SDZ PSC 833克服了P388/ADM和K562/ADM细胞的多重耐药性[Naito 等人，(1997)，Cancer Chemother.Pharmacol.40，Suppl.S20]。

另一种用于克服多重耐药性的方案是对活性剂的化学改性。这种 方案试图通过使抗肿瘤活性剂与不同的大分子结合来克服肿瘤细胞的 耐药性。在该方案中大分子起到了作为活性剂载体的作用。这就是所 谓的载体系统。

在1992年就已经指出：用加载阿霉素的聚异己基氰基丙烯酸酯 (polyisohexylcyanoacrylate)(PIHCA)纳米球能够克服多种肿瘤细胞系中 Pgp介导的耐药性[Cuvier等人，(1992)，Biochem.Pharmacol.44，509]。 用阿霉素耐药性C6细胞验证了这些试验，在该细胞中，加载阿霉素的 聚异己基氰基丙烯酸酯纳米球的抑制浓度50(inhibitory concentration 50)(IC50)明显低于未结合阿霉素的IC50[Bennis等人，(1994)，Eur.J. Cancer 30A，89]。使用适合的加载阿霉素的PIHCA纳米球，也能够在 肝癌细胞上验证该结果[Barraud等人，(2005)，J.Hepatol.42，736]。

通过胶态载体系统克服耐药性的机制开始引发了思考。根据一种 流传广泛的观点，由靶细胞通过内吞过程(endocytotic process)摄取了该 载体系统，因此避开了Pgp介导的耐药性机制。与聚异己基氰基丙烯 酸酯纳米粒子有关，这种观点被证实是错误的[Henry-Toulme等人， (1995)，Biochem.Pharmacol.50，1135]。在用PIHCA纳米粒子培养后的 耐药性肿瘤细胞系的荧光显微镜的研究中，在该细胞中没有观察到粒 子的聚集，而在如巨噬细胞的吞噬细胞中能够显示聚集。因此，将 PIHCA纳米粒子对多重耐药性的克服作为聚合物基质与活性剂的产物 的协同作用来讨论。这种假设得到了显示出加载阿霉素的聚异己基氰 基丙烯酸酯(PIBCA)纳米粒子对耐药性P388/Adr细胞具有增强的细胞 毒性作用的试验的支持[Colin de Verdiere等人，(1994)，Cancer Chemother.Pharmacol.33，504]。用PIBCA纳米粒子培养细胞引起在靶 细胞中活性剂浓度5倍的增长。与内吞摄取纳米粒子相反，讨论了纳 米粒子/细胞的相互作用作为以该现象为基础的机制。