[发明专利]用细胞培养物培养的流感病毒制备含非病毒颗粒抗原的佐剂疫苗

说明书

本文引用的所有文件全文纳入本文作为参考。

技术领域

本发明属于用佐剂配制疫苗来提供保护以抵御流感病毒感染的领域。

背景技术

目前，疫苗生产中培养流感病毒的标准方法使用含胚的SPF鸡蛋，从鸡蛋内含物(尿囊液)中纯化病毒。然而，最近已用细胞培养物培养病毒，该方法可能在短期内产生大量抗原。此外，该方法能产生因禽类致病性而不能用鸡蛋培养的病毒。

巴克斯特(Baxter)科学家的参考文献1比较了从鸡蛋或Vero细胞培养的病毒制备的三价全病毒颗粒疫苗(WVV)。比较了这两种疫苗诱导体液和细胞介导免疫力的能力。这些作者报道了Vero衍生疫苗的免疫原性与鸡蛋衍生疫苗的相当，但就T细胞应答而言Vero衍生疫苗更好。据报道，对于季节性流感病毒抗原性漂移，T细胞应答比抗体应答更耐受，从而提高了年际免疫力(year-to-year immunity)。

在这些结果的鼓舞下，巴克斯特继续开发了商品名为PREFLUCEL^TM的Vero衍生产物。然而，在2004年12月，巴克斯特暂停了其II/III期临床研究，因为发热及有关症状的比例高于现有疫苗所见的。

因此，需要基于细胞培养物而不是鸡蛋培养的流感病毒的安全而有效的疫苗。

发明内容

目前有各种形式的流感病毒疫苗可用(例如，见参考文献2的第17和18章)。许多疫苗以活病毒或灭活病毒为基础，其中灭活疫苗以完整的病毒颗粒、“裂解”的病毒颗粒或纯化的表面抗原(包括血凝素和神经氨酸酶)为基础。失败的PREFLUCEL^TM产品使用完整的流感病毒颗粒。

使用完整的病毒颗粒可能与反应原性有关[3]。为避免PREFLUCEL^TM产品所见的反应原性问题，本发明不利用完整的病毒颗粒抗原，即使用非病毒颗粒抗原(例如，裂解病毒颗粒或纯化的表面抗原)。这些抗原衍生自用细胞培养物培养的病毒。有报道[1]说利用细胞培养物培养的完整病毒颗粒会增强T细胞应答，然而本文的数据显示利用非病毒颗粒抗原时只有适度的T细胞应答。因此，为增强T细胞应答，本发明联用非病毒颗粒抗原和佐剂。

PREFLUCEL^TM产品不含佐剂，以前向流感疫苗中加入佐剂与潜在的超敏性有关。例如，参考文献4报道了含明矾佐剂的流感疫苗能使豚鼠致敏，而无佐剂疫苗不会，佐剂明显提高了鸡蛋蛋白质发生过敏的活性。类似地，参考文献5报道了与无佐剂抗原相比，将流感病毒抗原吸附到铝盐上导致较早的卵白蛋白致敏。此外，参考文献6报道了以前接受含明矾佐剂的卵白蛋白的动物在流感病毒感染的早期阶段显示过敏反应加重。对疫苗组分的超敏性特别是流感疫苗的问题，因为它们通常每年给予。由于避免了用于培养病毒的鸡蛋系统，本发明还有利地避免了卵白蛋白相关的任何问题，这随着流感疫苗接种更广泛而变得更加明显(例如，随着免疫接种拓展至以前未指示要接种疫苗的患者群，和随着所述靶群体中免疫接种的患者比例增高)。

因此，本发明提供一种免疫原性组合物，其包含：(i)从细胞培养物培养的病毒制备的非病毒颗粒流感病毒抗原；和(ii)佐剂。

本发明还提供制备免疫原性组合物的方法，该方法包括混合以下组分的步骤：(i)从细胞培养物培养的病毒制备的非病毒颗粒流感病毒抗原；和(ii)佐剂。

本发明还提供一种试剂盒，其装有：(i)包含从细胞培养物培养的病毒制备的非病毒颗粒流感病毒抗原的第一试剂盒组分；和(ii)包含佐剂的第二试剂盒组分。

流感病毒抗原一般包含流感病毒血凝素。佐剂优选水包油乳液佐剂，例如MF59，更优选不含任何铝盐。现已发现水包油乳液能增强流感特异性T细胞应答，这些乳液还能增强记忆B细胞应答。此外，它们能提高针对异源变体(heterovariant)流感毒株的交叉反应性，从而使得疫苗可诱导保护性免疫力，即使疫苗毒株与流行毒株不匹配。