[发明专利]制备永久人细胞系的方法

权利要求书

1.一种制备永久人细胞系的方法，其中用一种核酸分子或至少两种不 同核酸分子同时转染分离的原代羊水细胞，并且在转染一种核酸分子的情 况下，该核酸分子显示允许人腺病毒E1A和E1B表达及重组多肽表达的序 列；而在转染至少两种不同核酸分子的情况下，第一种核酸分子显示允许 人腺病毒E1A和E1B表达的序列，第二种核酸分子显示允许至少一种重组 多肽表达的序列，其中来自人腺病毒的E1A和E1B的序列由人腺病毒血清 型5的核苷酸1-4344、505-3522或核苷酸505-4079组成。

2.前述任一权利要求的方法，其中所述重组多肽是：激素；凝血因子； 生长因子；柯萨奇病毒和腺病毒受体；抗体；病毒抗原、细菌抗原或寄生 虫抗原；或用于产生重组病毒的互补因子。

3.前述任一权利要求的方法，其中，E1A的序列存在于一个核酸分子 上，E1B的序列存在于另一个不同的核酸分子上。

4.权利要求3的方法，其中重组多肽的序列存在于E1A和E1B的两个 核酸分子之一上。

5.前述任一权利要求的方法，其中允许E1A和E1B或重组多肽表达的 序列显示异源启动子和/或异源转录终止元件。

6.权利要求5的方法，其中所述启动子是CMV启动子、EF-1α启动子、 CAG启动子、人或鼠pgk启动子、RSV启动子或SV40启动子；所述转录 终止元件是SV40大T抗原的聚腺苷酸化序列或者人G-CSF基因的聚腺苷 酸化序列。

7.前述任一权利要求的方法，其中允许重组多肽表达的序列含有重组 酶识别序列，所述识别序列位于所述重组多肽的编码序列或者所述重组多 肽的全表达盒的侧翼。

8.权利要求7的方法，其中所述识别序列是loxP、attB/attP或Frt序列。

9.前述任一权利要求的方法，其中所述被转染的核酸分子不显示编码 选择标记的序列。

10.能够根据权利要求1-9任一项的方法得到的永久人细胞系。

11.权利要求10的细胞系用于制备多肽的用途。

12.权利要求10的细胞系用于制备病毒基因转移载体的用途。