[发明专利]乳酸的制造方法

说明书

技术领域

本发明涉及具有生产乳酸的能力的微生物以及使用了该微生物的乳酸制造方法。 

作为生产乳酸的微生物，已报道有乳酸菌属(Lactobacillus)、乳球菌属(Lactococcus)等乳酸菌，根霉菌属(Rhizopus)的丝状菌、酵母菌属(Saccharomyces)等酵母以及大肠埃希杆菌，但已知乳酸菌显示复杂的营养要求性，且乳酸的光学纯度低(非专利文献1和2)；丝状菌多有甘油、乙醇或富马酸等副产物(非专利文献3和4)；酵母在使用重组菌株时也会副产生大量的乙醇，从而对于耗糖量的收率低(非专利文献5)。 

作为使用了大肠埃希杆菌的乳酸制造方法，已知有使用丙酮酸甲酸裂解酶基因和与有机酸或乙醇的副产生有关的基因的缺失株的方法(非专利文献6)，使用磷酸转乙酰酶基因和磷酸烯醇丙酮酸羧化酶基因的突变株的方法(非专利文献7)，但乳酸的生产率均较低。 

大肠埃希杆菌(Escherichia coli)的4-羟基苯甲酸聚异戊二烯基转移酶(4-Hydroxybenzoate polyprenyltransferase)(以下称作UbiA蛋白质)以及2-八异戊二烯基苯酚羟化酶(以下称作UbiB蛋白质)是与大肠埃希杆菌中泛醌的生物合成有关的蛋白质，且UbiA蛋白质和UbiB蛋白质的氨基酸序列及编码该蛋白质的基因的碱基序列是已知的(非专利文献8和9)。另外，对于多数微生物，其染色体DNA的整个碱基序列是已知的(非专利文献10)。 

已知在大肠埃希杆菌中，泛醌生物合成基因的突变株蓄积有2.5g/L的D-乳酸(非专利文献11和12)，该突变株(AN59株)为ubiE基因的突变株(非专利文献13)，其它泛醌生物合成基因产物的活性已降低了的株的乳酸的生产率以及泛醌生物合成基因突变株的乙酸产量等是未知的。 

乙酸是乳酸发酵时的副产物，由于妨碍乳酸的精制或聚合化，因此寻 求乙酸的副产量少、廉价的乳酸制造方法。 

非专利文献1：Appl.Microbiol.Biotechnol.，45，307(1996) 

非专利文献2：Enzyme Microb.Technol.，26，87(2000) 

非专利文献3：Appl.Biochem.Biotechnol.，51，57(1995) 

非专利文献4：J.Biosci.Bioeng.，97，19(2004) 

非专利文献5：Appl.Environ.Microbiol.，71，2789(2005) 

非专利文献6：Appl.Environ.Microbiol.，69，399(2003) 

非专利文献7：Appl.Environ.Microbiol.，65，1384(1999) 

非专利文献8：FEBS Letters，307，347(1992) 

非专利文献9：Science，257，771(1992) 

非专利文献10：http://www.tigr.org/tdb/mdb/mdbcomplete.html 

非专利文献11：J.Bacteriol.，99，450(1969) 

非专利文献12：Biochem.J.，117，551(1970) 

非专利文献13：J Bacteriol.，182，5139(2000) 

本发明的目的在于提供乳酸的生产率有所提高的微生物及使用了该微生物的乳酸制造方法。 

本发明涉及以下的(1)～(8)。 

(1)一种微生物，其中，4-羟基苯甲酸聚异戊二烯基转移酶活性或者2-八异戊二烯基苯酚羟化酶活性降低或丧失，且所述微生物具有生产乳酸的能力。 

(2)上述(1)所述的微生物，其具有对下述蛋白质进行编码的基因的一部分或全部缺失了的染色体DNA，所述蛋白质为具有4-羟基苯甲酸聚异戊二烯基转移酶活性的蛋白质或具有2-八异戊二烯基苯酚羟化酶活性的蛋白质。 

(3)上述(2)所述的微生物，其中，基因为对下述蛋白质进行编码的基因：具有序列号1或序列号2所示的氨基酸序列的蛋白质，或者与序列号1或2所示的氨基酸序列具有80％以上的同源性、且具有4-羟基苯甲酸聚异戊二烯基转移酶活性或2-八异戊二烯基苯酚羟化酶活性的蛋白质。