[发明专利]食管异常的诊断试剂盒和方法

说明书

技术领域

本发明涉及检测食管异常如巴雷特食管(Barrett’s oesophagus)或与巴雷 特相关的发育异常，包括检测腺癌的方法。另外，本发明还涉及对食管细胞 进行取样并检测与上述病症相关的细胞标记物的试剂盒。

背景技术

食管腺癌(oesophageal adenocarcinoma)正快速增多，其前期症状称作 巴雷特食管。早期诊断对于改善食管腺癌所致的可怕结果(5年死亡率 ＞80％)是关键的。目前，人群中大多数巴雷特食管患者仍未诊断出来。另 外，在那些诊断出来的患者中，目前也不可能准确预测将发展成癌症的 小比例(每年1％)。已经建议应该进行内窥镜筛选以检测那些有患巴雷特 食管风险的人——例如对50岁以上患有慢性胃灼热的男性进行内窥镜检 查。这花费太大，并需要服务资源。

内窥镜检查是强侵入性技术。患者需要输注并局部麻醉。内窥镜需 要训练有素的内窥镜医师和两名护士。另外，内窥镜活检(endoscopic biopsy)需要在分析实验室中进行，所述分析需要有经验的组织学专家对 切片进行检查。因此，可以想象内窥镜检查导致患者不适，从进行所述 程序所需的设备和资源以及人员水平方面说都极为昂贵。

内窥镜检查有万分之一的死亡率，和千分之一的并发症风险，如出 血或穿孔。虽然这似乎统计学上低，但是并发症是非常危险的。一种并 发症可以是从活检部位食管出血。这种出血可以严重到需要输血，因此 是对受检查个体的严重风险。缘于食管活检的第二种风险是食管穿孔的 风险。如果此事件发生，患者可能立即面临食管手术的威胁。这非常严 重，不仅是因为需要常规的麻醉，还因为手术过程对食管的严重影响。 即使内窥镜检查的进行没有这些危险的并发症，患者也需要时间恢复。 甚至患者需要休假一天而不能工作。

诊断食管腺癌或能导致食管腺癌的明确发育异常的金质标准是通过 提取深层细胞样品保存细胞结构。如上所述，这通过内窥镜检查来进行。 为了评价发育异常，组织学家必须看所有的切片，对许多因素进行评分。 这些因素包括核聚集和跨组织全部深度的形态学特征。一个标准是发育 异常必须延伸到组织样品的表面，因此需要全部深度的切片来评估这是 否已经发生。一旦组织结构丧失，则细胞学家通常不能告诉哪些细胞是 柱形的，所述柱形表示巴雷特食管或发育异常食管。另外，如果存在炎 性细胞例如淋巴细胞，当组织结构已经丧失时没有位置信息提供说明下 述情况的线索：这些细胞是否已迁徙到对于评估发育异常重要的部位， 或者它们是否收集自一些其他轻微创伤处，例如由吞咽骨头或食物中其 他尖锐物体所致的轻微创伤处。因此，通常认为完整的组织结构对于患 者病情的准确评估是必需的。

已经使用一种可替代的技术来收集内窥镜刷洗物(endoscopic brushings)。这种技术具有与活检内窥镜收集相关的上述所有风险。虽然 内窥镜刷具有样品收集可以定向到巴雷特食管部位以及所获细胞材料的 量非常小的优点，但内窥镜刷头受大小限制，因为它必须和内窥镜通道 相匹配。另外，甚至进行内窥镜刷洗也需要熟练的操作人员。对正确进 行刷洗的限度也极窄。如果刷洗得过猛，则网状细胞污染会使样品的有 意义分析模糊。但是，如果刷洗得太轻，则不能收集到足够的细胞材料 进行有意义的分析。因此，完成令人满意的内窥镜刷洗所需要的技巧甚 至高于对内窥镜检查专家的要求。

当采用内窥镜活检时，任何一个程序中大约收集4～20个活检组织 进行分析。虽然这些数目的活检组织，该程序中仍只有约1％的食管表面 积得以取样。另外，如果取样过程中巴雷特食管内的发育异常部位在空 间上错过，则很容易获得假阴性结果。这对于正接受评估的患者而言明 显是重大的危险因素。

已考虑使用新兴技术如相机胶囊(camera capsules)进行巴雷特食管的 评估或监测。相机胶囊是小丸状物体，其能够在通过食物通道时收集图 像。但是，这种胶囊通过食管非常快，因此，在通过食管时收集图像的 机会是非常有限的。另外，相机胶囊是非定向的。因此，当它们沿着食 管滚动翻转时，它们只能取到食管内部组织的非常窄条的样品。另外， 这种取样实际上是随机的，因为这取决于相机在通过食管“旅行”时的 滚转运动。因此，如果相机恰好在通过患者“旅行”时未对准巴雷特食 管，则不能收集该患者的任何有意义信息。这也会导致假阴性诊断。另 外，利用这种方法不可能进行样品收集。