[发明专利]用于琥珀酸盐之生长关联性生产的方法和生物

权利要求书

1.非天然微生物中包含一个或多个基因中断，而此基因中断 发生在对一种酶进行编码的基因中，这种酶会在其活性被上述基因中 断降低时，将琥珀酸盐的生产与微生物生长专向关联起来，因而此基 因中断可以将稳定的琥珀酸盐之生长关联性生产传递给此非天然微生 物。

2.对于第1条权利要求中的非天然微生物，其上述一个或多 个基因中断包括表1中列出的代谢路径改造。

3.对于第1条权利要求中的非天然微生物，其上述一个或多 个基因中断包括上述一个或多个基因的缺失。

4.对于第1条权利要求中的非天然微生物，其中的非天然微 生物选自经表1中所列之代谢路径改造的微生物组。

5.对于第1条权利要求中的非天然微生物，其微生物可包括 细菌、酵母或真菌。

6.对于第5条权利要求中的非天然微生物，上述细菌可以是 E.coli，A.succiniciproducens，A.succinogenes，M. succiniciproducens，R.etli，Bacillus subtilis， Cotynebacterium glutamicum，Gluconobacter oxydans，Zymomonas mobilis，Lactococcus lactis，Lactobacillus plantarum， Streptomyces coelicolor，Clostridium acetobutylicum， Pseudomonas fluorescens和Pseudomonas putida中的一种。

7.对于第5条权利要求中的非天然微生物，上述酵母可以是 Saccharomyces cerevisiae，Schizosaccharomyces pombe， Kluyveromyces lactis，Klvyveromyces marxianus，Aspergillus terreus，Aspergillus niger和Pichiapastoris中的一种。

8.一种非天然微生物，它包含一组将琥珀酸盐生产与微生物 生长专向关联起来的代谢路径改造，而这组代谢路径改造由以下基因 组合中选择的一个或多个基因中断组成：

(a)adhE，ldhA

(b)adhE，ldhA，ackA-pta

(c)pfl，ldhA

(d)pfl，ldhA，adhE

(e)ackA-pta，pykF，atpF，sdhA

(f)ackA-pta，pykF，ptsG，或

(g)ackA-pta，pykF，ptsG，adhE，ldhA，

或其直系同源基因，其中上述微生物表现出稳定的琥珀酸盐之生 长关联性生产。

9.对于第8条权利要求中的非天然微生物，其基因可对进一 步包含pykA、atpH、sdhB或dhaKLM中至少一个基因中断的代谢路 径改造(e)ackA-pta，pykF，atpF，sdhA进行编码。

10.对于第8条权利要求中的非天然微生物，其基因可对进一 步包含pykA或dhaKLM中至少一个基因中断的代谢路径改造(f) ackA-pta，pykF，ptsG进行编码。

11.对于第8条权利要求中的非天然微生物，其基因可对进一 步包含pykA或dhaKLM中至少一个基因中断的代谢路径改造(g) ackA-pta，pykF，ptsG，adhE，ldhA进行编码。

12.对于第8条权利要求中的非天然微生物，上述一个或多个 基因的中断包含基因的缺失。

13.对于第8条权利要求中的非天然微生物，其微生物可包括 细菌、酵母或真菌。