[发明专利]细胞核移植

权利要求书

1.细胞核移植方法，其包括以下步骤：

a.构建具有通过酶促被部分除去透明带的至少一个猪卵母细胞，

b.将该猪卵母细胞分成2或3部分，从而获得至少一个细胞质体，

c.构建具有所需遗传特性的猪成纤维细胞供体细胞或猪成纤维细 胞细胞核，

d.将至少一个细胞质体与该猪成纤维细胞供体细胞或膜包围的猪 成纤维细胞细胞核融合，

e.得到重建的猪胚胎，

其中所述方法不包括在非人类动物体上进行的外科手术步骤。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述猪卵母细胞被分成3部 分，从而获得2个细胞质体。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中通过突变、缺失和／或 插入对所需一个或多个基因进行修饰而获得猪成纤维细胞供体细胞或 猪成纤维细胞细胞核的所需遗传特性。

4.根据权利要求1所述的方法，其中融合方法选自化学融合、电 融合和生物融合。

5.根据权利要求1所述的方法，其中融合以至少一步进行。

6.根据权利要求1所述的方法，其中融合以至少两步进行。

7.根据权利要求4所述的方法，其中融合的第一步位于至少一个 细胞质体和猪成纤维细胞供体细胞或膜包围的猪成纤维细胞细胞核之 间。

8.根据权利要求4所述的方法，其中融合的第二步位于权利要求 7的至少一个融合对和至少一个细胞质体之间。

9.产生遗传修饰的或转基因的猪的方法，其包括如下步骤：

a.构建具有通过酶促被部分除去透明带的至少一个猪卵母细胞，

b.将该猪卵母细胞分成2或3部分，从而获得具有核的卵母细胞 和至少一个细胞质体，

c.构建具有所需遗传特性的猪成纤维细胞供体细胞或猪成纤维细 胞细胞核，

d.将至少一个细胞质体与该猪成纤维细胞供体细胞或膜包围的猪 成纤维细胞细胞核融合，

e.得到重建的猪胚胎，

f.活化该重建的猪胚胎进行有丝分裂以形成多细胞猪胚胎，

g.培养所述多细胞猪胚胎，以及

h.将所述培养的猪胚胎转移到猪寄主中，使得该猪胚胎发育成遗 传修饰的猪胎儿，

其中所述方法不包括在非人类动物体上进行的外科手术步骤。

10.根据权利要求9所述的方法，其中步骤b中所述猪卵母细胞 被分成3部分，从而获得至少两个细胞质体。

11.根据权利要求9或10所述的方法，其中用于活化重建的猪胚 胎的方法选自如下构成的组：电脉冲、化学诱导休克、升高胞内二价 阳离子水平和减少磷酸化。

12.根据权利要求9或10所述的方法，其中步骤d)和f)顺次 或同时进行。

13.根据权利要求9或10所述的方法，其中所述多细胞猪胚胎在 体外培养。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述多细胞猪胚胎在序贯 培养基中进行培养。

15.根据权利要求9或10所述的方法，其中所述多细胞猪胚胎在 转移到猪寄主前被深低温保藏。

16.根据权利要求15所述的方法，其中多细胞猪胚胎处于胚泡期。

17.根据权利要求15所述的方法，其中所述猪胚胎在玻璃化前被 培养至胚泡期。

18.根据权利要求16所述的方法，其中所述猪胚胎在玻璃化前被 培养至胚泡期。

19.通过权利要求9所限定的方法得到的遗传修饰的猪的组织细 胞，其中所述组织细胞具有来自至少3个不同母源的线粒体。

20.根据权利要求19所述的遗传修饰的猪的组织细胞，在所述细 胞内具有来自至少4个不同母源的线粒体。