[发明专利]使用低温下结晶纯化APO－2配体/TRAIL的方法

说明书

发明领域

本发明涉及结晶参与的Apo2L/TRAIL的纯化。

发明背景

已经有多种分子鉴定为肿瘤坏死因子(“TNF”)细胞因子家族的成员，诸如肿瘤坏死因子-α(“TNF-α”)、肿瘤坏死因子-β(“TNF-β”或“淋巴毒素-α”)、淋巴毒素-β(“LT-β”)、CD30配体、CD27配体、CD40配体、OX-40配体、4-1BB配体、Apo-1配体(也称作Fas配体或CD95配体)、Apo-2配体(也称作Apo2L或TRAIL)、Apo-3配体(也称作TWEAK)、APRIL、OPG配体(也称作RANK配体、ODF或TRANCE)和TALL-1(也称作BlyS、BAFF或THANK)[参见例如Gruss and Dower，Blood，85：3378-3404(1995)；Schmid et al.Proc.Natl.Acad.Sci.83：1881(1986)；Dealtry et al.Eur.J.Immunol.17：689(1987)；Pitti et al.J.Biol.Chem.271：12687-12690(1996)；Wiley et al.Immunity，3：673-682(1995)；Browning et al.Cell，72：847-856(1993)；Armitage et al.Nature，357：80-82(1992)，WO 97/01633，公开于1997年1月16日；WO 97/25428，公开于1997年7月17日；Marsters et al.Curr.Biol.8：525-528(1998)；Chicheportiche et al.Biol.Chem.272：32401-32410(1997)；Hahne et al.J.Exp.Med.188：1185-1190(1998)；WO 98/28426，公开于1998年7月2日；WO 98/46751，公开于1998年10月22日；WO 98/18921，公开于1998年5月7日；Moore et al.Science，285：260-263(1999)；Shu et al.J.Leukocyte Biol.65：680(1999)；Schneider et al.J.Exp.Med.189：1747-1756(1999)；Mukhopadhyay et al.J.Biol.Chem.274：15978-15981(1999)]。在这些分子中，TNF-α、TNF-β、CD30配体、4-1BB配体、Apo-1配体、Apo-2配体(Apo2L/TRAIL)和Apo-3配体(TWEAK)有报道说涉及凋亡性细胞死亡。

数年前将Apo2L/TRAIL鉴定为TNF细胞因子家族的成员[参见例如Wiley et al.Immunity，3：673-682(1995)；Pitti et al.J.Biol.Chem.271：12687-12690(1996)]。全长人Apo2L/TRAIL多肽是长281个氨基酸的II型跨膜蛋白质。有些细胞能通过酶促切割多肽的胞外区而生成该多肽的天然可溶形式[Mariani et al.J.Cell.Biol.137：221-229(1997)]。对可溶形式Apo2L/TRAIL的晶体学研究揭示了与TNF及其它相关蛋白质的结构类似的同三聚体结构[Hymowitz et al.Molec.Cell，4：563-571(1999)；Hymowitz et al.Biochemistry，39：633-644(2000)]。然而，与其它TNF家族成员不同，发现Apo2L/TRAIL具有独特的结构特征，即三个半胱氨酸残基(同三聚体中各个亚基的第230位)一起与锌原子配位，而且锌结合对于三聚体的稳定性和生物学活性来说是重要的[Hymowitz et al.同上；Bodmer et al.J.Biol.Chem.275：20632-20637(2000)]。

文献中已有报道，Apo2L/TRAIL可能在免疫系统的调节中起作用，包括自身免疫病，诸如类风湿性关节炎和HIV治疗中[参见例如Thomas et al.J.Immunol.161：2195-2200(1998)；Johnsen et al.Cytokine，11：664-672(1999)；Griffith et al.J.Exp.Med.189：1343-1353(1999)；Song et al.J.Exp.Med.191：1095-1103(2000)]。