[发明专利]软骨形成组合物及其使用方法

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求2005年5月27日提交的临时申请60/685,224的优先权，该使其结合于此作为参考。

发明领域

本发明涉及向盘提供相对容易获得的软骨细胞样细胞来上调基质产生，从而防止盘进一步变性的组合物和方法。

背景

认为椎间盘随年龄增长的进行性变性与细胞密度的降低和软骨特异性基质组分，尤其是蛋白聚糖的合成减少有关。例如，参见S.J.Lipson & H.Muir H.沃尔沃(Volvo)基础科学奖：实验椎间盘变性中的蛋白聚糖(Proteoglycans inExperimental Intervertebral Disc Degeneration)，6 SPINE 194-210(1981)；A.G.Nerlich等，沃尔沃基础科学研究奖获得者：人体腰椎间盘年龄相关变化的免疫组织学标志(Immunohistologic Markers for Age-related Changes of HumanLumbar Intervertebral Disc)，22SPINE 2781-95(1997)；R.H.Pearce等，人腰椎间盘的退变及化学组成(Degeneration and the Chemical Composition of theHuman Lumbar Intervertebral Disc)，5J.ORTHOP.RES.198-205(1987)。蛋白聚糖减少的一种解决办法是将自体盘细胞植入变性盘。认为这些植入细胞通过上调基质产生来刺激盘。测试了自体盘细胞的植入，表明技术上可行并且生物学上与修复盘损伤和延迟盘变性相关。参见T.Ganey等，犬类模型中的盘软骨细胞移植：治疗变性或受损椎间盘(Disc Chondrocyte Transplantation in a CanineModel：A Treatment for Degenerated or Damaged Intervertebral Disc)，28 SPINE2609-20(2003)。然而，采集自体细胞所致供体部位病态和免疫应答的风险限制了这些方法在临床实践中的应用。

发明概述

因此，本发明的目的是向盘提供相对容易获得的软骨细胞样细胞来上调基质产生，从而防止盘进一步变性。

一方面，本发明提供一种包含基本上纯的细胞群和用至少一种生物活性因子强化的组合物，所述生物活性因子能使所述细胞群的至少一部分表达改变量的至少一种软骨形成标志。在本发明的各种实施方式中，所述细胞群选自：骨髓细胞、脂肪细胞和肌细胞。并且，在本发明的一个实施方式中，所述至少一种生物活性因子是LMP-1。

另一方面，本发明提供包含上述组合物与合适的运载体或稀释剂的制剂。在本发明各实施方式中，本发明组合物用适合肌内、静脉内、髓内或关节内注射的液体或半固体运载体配制。

另一方面，本发明提供治疗软骨细胞衍生组织的方法，所述方法包括给予需要这种治疗的对象有效量的上述实施方式之一所述的组合物。在本发明各实施方式中，在有利于分化形成软骨形成细胞的条件下培养所述细胞群。

又一方面，本发明提供治疗软骨细胞衍生组织的方法，所述方法包括给予需要这种治疗的对象有效量的编码所述至少一种生物活性因子的载体。在一个实施方式中，所述至少一种生物活性因子是LMP-1。

附图简要说明

图1是显示Ad-f35-LMP1对盘细胞产生硫酸化-葡萄糖胺聚糖(sGAG)的作用的柱状图。数据按对照组的sGAG值标准化(均值±SEM，每组n＝6)。符号“*”表示与对照组相比P＜0.05。

图2是显示Ad-LMP1-GFP对盘细胞LMP-1mRNA水平的作用的柱状图。数据按对照组的mRNA表达标准化(均值±SD，每组n＝6)。符号“*”表示与对照组相比P＜0.05。

图3是显示Ad-f35-LMP1对盘细胞聚集蛋白聚糖mRNA水平的作用的柱状图。数据按对照组的聚集蛋白聚糖值标准化(均值±SEM，每组n＝6)。符号“*”表示与对照组相比P＜0.05。

图4是显示Ad-f35-LMP1对盘细胞BMP-2mRNA水平的作用的柱状图。数据按对照组的BMP-2mRNA表达标准化(均值±SEM，每组n＝6)。符号“*”表示与对照组相比P＜0.05。

图5是显示Ad-f35-LMP1对盘细胞BMP-7mRNA水平的作用的柱状图。数据按对照组的BMP-7mRNA表达标准化(均值±SEM，每组n＝6)。符号“*”表示与对照组相比P＜0.05。