[发明专利]使用融合多肽的共翻译转运的噬菌体展示

权利要求书

1.一种丝状噬菌体展示方法，其中由DNA文库编码的目标多肽被展示在噬菌体颗粒上，其中所述目标多肽被共翻译转运穿过革兰氏阴性细菌胞质膜。

2.权利要求1的方法，其中所述共翻译转运基于信号识别颗粒途径实现。

3.权利要求1或2的方法，其中所述用于要展示在噬菌体颗粒上的目标多肽转运的信号序列是促进TrxA共翻译转运的信号序列。

4.权利要求1、2或3的方法，其中所述用于要展示在噬菌体颗粒上的目标多肽转运的信号序列选自TorT、SfmC、FocC、CcmH、YraI、TolB、NikA、FlgI和DsbA的信号序列及其同系物。

5.权利要求4的方法，其中所述用于要展示在噬菌体颗粒上的目标多肽转运的信号序列选自TorT、SfmC、TolB和DsbA的信号序列。

6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述要展示在噬菌体颗粒上的目标多肽是重复蛋白。

7.权利要求1-6中任一项的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)构建含融合多肽表达盒的丝状噬菌体或噬菌粒载体，所述融合多肽具有促进融合蛋白共翻译转运穿过革兰氏阴性细菌胞质膜的N-末端信号序列；

(b)通过将编码目标多肽的DNA文库克隆入步骤(a)的载体的表达盒中，构建噬菌体或噬菌粒载体的组合文库；

(c)用步骤(b)的载体的文库转化合适的革兰氏阴性细菌；和

(d)进行多轮噬菌体展示选择，以基于所展示目标多肽的特性分离噬菌体颗粒。

8.一种丝状噬菌体展示方法，其中展示在噬菌体颗粒上的目标多肽使用信号序列共翻译转运穿过革兰氏阴性细菌胞质膜，所述信号序列选自TorT、SfmC、FocC、CcmH、YraI、TolB、NikA、FlgI和DsbA的信号序列及其同系物。

9.权利要求8的方法，其中所述信号序列选自TorT、SfmC、TolB和DsbA的信号序列。

10.一种含编码融合蛋白的基因构建物的噬菌体或噬菌粒载体，所述融合蛋白含要展示在噬菌体颗粒上的目标多肽和信号序列，所述信号序列选自TorT、SfmC、FocC、CcmH、YraI、TolB、NikA、FlgI和DsbA的信号序列及其同系物。

11.权利要求10的载体，其中所述信号序列选自TorT、SfmC、TolB和DsbA的信号序列。

12.一种含编码融合蛋白的基因构建物的噬菌体文库或噬菌粒载体文库，其中每种融合蛋白都包含促进TrxA共翻译转运的信号序列和要展示在噬菌体颗粒上的目标多肽，其中每种目标多肽都由DNA文库的成员编码。

13.权利要求12的载体文库，其中所述信号序列选自TorT、SfmC、FocC、CcmH、YraI、TolB、NikA、FlgI和DsbA的信号序列及其同系物。

14.权利要求12的载体文库，其中所述信号序列选自TorT、SfmC、TolB和DsbA的信号序列。

15.权利要求12至14中任一项的载体文库，其中所述编码目标多肽的DNA文库是编码重复蛋白的DNA文库。