[发明专利]使用来自脐带血的基质细胞将来自脐带血的有核细胞增量(expanding)及移植(engrafting)的方法

说明书

相关申请案

本申请主张于2005年4月19日申请，案号为60/673,014且案名为「脐带血单核细胞的活体外增量」以及于2005年6月30日申请，案号为60/695,506且案名为「使用来自脐带血的基质细胞将来自脐带血的有核细胞增量及移植(engraft)的方法」的美国临时申请案的优先权，且借着参考这两篇的全部内容，将其整合于此。

技术领域

本发明关于一种利用来自脐带血的贴附性基质细胞以促使同样由脐带血中取得的有核细胞的增量及移植物移入(engraftment)。

背景技术

一些美国专利，诸如美国专利5,486,359号、5,591,625号、5,736,396号、5,811,0949号、5,827,740号、5,837,539号、5,908,782号、5,908,784号、5,942,225号、5,965,436号、6,010,696号、6,022,540号、6,087,113号、5,858,390号、5,804,446号、5,846,796号、5,654,186号、6,054,121号、5,827,735号以及5,906,934号揭露可将间充质干细胞(mesenchymal stem cell，MSC)分化成数种祖细胞，例如肌肉祖细胞、结缔组织细胞的祖先或是肝卵圆细胞。肌肉祖细胞进一步分化成心脏、骨骼和平滑肌，而结缔组织细胞的祖先可分化成骨骼。

当移植(transplanted)到胎羊中时，成人的骨髓间充质干细胞移植(engraft)到许多的器官中，且其随着组织特异体系进行分化。在动物模式中，在共移植(co-transplantation)后它们会增加供给者造血细胞的移植物移入(engraftment)，且在免疫缺乏小鼠中，它们会迁移到肌肉退化区域以进行肌肉分化。在人类，骨髓间充质干细胞已用于骨髓摧毁性治疗后，以再生骨髓微环境。

美国申请案09/985,335号(于此并入参考)揭露已知为非限制性体干细胞(unrestricted somatic stem cells，USSCs)的体干细胞，其可从人体脐带血、胎盘血以及/或是新生儿的血中取得。非限制性体干细胞不同于但是可以分化成间充质干或是祖细胞、造血体系干或是祖细胞、神经干或是祖细胞、或是内皮干或是肝祖细胞。非限制性体干细胞扮演造血体系的祖细胞、间充质干细胞以及神经干细胞。这个独特的多功能可能性，以及于不同分化条件下将这些细胞增量成不论是仍维持为干细胞或是作为定型细胞的技术，将允许这些细胞的精确特性化、标准化以及应用，以用于再生医学中的制造以及干细胞治疗的实施。

发明内容

我们已确认存在于脐带血(umbilical cord blood，UCB)中的黏附性基质细胞可用于支持同样出现于脐带血中的有核细胞的增量。我们也已确认从脐带血取得的黏附性基质细胞也可用于增加需要有核细胞移植的患者对得自脐带血的有核细胞的移入(engraftment)。

因此，本发明的第一方向，其特征在于培养来自脐带血的有核细胞的方法，其涉及制备包含有核细胞与黏附性基质细胞的共培养，其中有核细胞与黏附性基质细胞都是取自脐带血，且有核细胞与黏附性基质细胞分别添加到该共培养中。

于第一方向的一个实施例中，所述方法也可包含在培养有核细胞与黏附性基质细胞的同时、培养期间间歇地，或是在培养之后，将生长培养基接触一种选择成份，以选出有核细胞或是黏附性基质细胞，其中该选择成份包含多种选择性分子，其对有核细胞或是黏附性基质细胞具有特定的亲和性。

本发明的第二方向，其特征在于增加一受试者体内供给者有核细胞的移植物移入(engraftment)的方法，其通过对该受试者投药一个具有来自脐带血的有核细胞以及来自脐带血的黏附性基质细胞的组合物。

于本发明的第一与第二方向的一实施例中，有核细胞包含诸如祖细胞(亦即造血干细胞)的不成熟细胞，或是诸如粒细胞、嗜中性白细胞、巨核细胞、巨噬细胞、T细胞、自然杀伤细胞以及红细胞的成熟细胞。有核细胞也可选自CD34^-细胞、CD34⁺细胞以及Lin^-细胞。在一较佳实施例中，有核细胞为CD34⁺，Lin^-细胞。在另一较佳实施例中，有核细胞为约占共培养40％的造血干细胞。