[发明专利]用于同时检测并鉴定不同类型的抗生素的体外方法以及相应的检定试剂盒

说明书

发明领域

本发明涉及一种方法，该方法在于在单一的反应混合物中同时使各种不同的生物学识别分子的集合反应，这些生物学识别分子能够以提高的灵敏度特异性地检测数种不同的分析物，并确定每种受检测的化合物所属的分析物类型，只要给定类型的分析物的特异性识别的原理不会干扰另一类型的分析物的特异性识别的原理。

本发明还涉及特别地设计用于实施本方法的检定试剂盒。

技术背景

支配很好地实施监控和检查食物链的基本原则需要尽可能在生产的上游进行检查分析，以便使得能够尽可能快地鉴定和分离怀疑受到污染的食品。

一般地，当进行检出测试(通常称为“筛选测试”)时，在第一次检查分析过程中被检测为阳性的样品仅假定是真正阳性的，并且其必须接受称为“确认”的第二次测试。相反地，如果初始检出测试得到阴性应答，这就足够了并且不需要进一步的分析来再次确认结果⁽¹⁾。

这项规则的第一个后果是，第一次检出方法必须能够包括最大量的化合物的检测。因而，筛选或检出测试应该优选地且在逻辑上是“多分析物测试”。

这项规则的第二个结果是，在筛选测试过程中知道在阳性样品中发现的化合物所属的类型是很重要的，以便能够直接转向至通常十分特定的确认方法，因为必须做到分离和鉴定所涉及的化合物。

这项规则的第三个结果是，筛选测试不能得到“假阴性”类型的结果，因为从此以后它们将逃避在该初始阶段的分析并且将不会在以后得到确认。

目前，已知各种用于检测抗生物素的方法：

-测量样品对细菌菌株生长的抑制能力的微生物学测试。这种类型的测试需要相对长的培养时间(3至16小时)才能获得结果。通常，这些测试(Delvotest^SP、BRT Test，Copan^TM，Eclipse^TM，Valio^TM)能够同时识别数种类型的抗生物素，因为所使用的细菌菌株通常对不同类型的数种化合物敏感。然而，这种类型的测试不允许鉴定受试抗生素化合物所属的确切类型。

-在检测小分子的情况下，体外测试根据存在于样品中的待研究的化合物与经标记的竞争剂之间存在竞争这一原理来工作，所述经标记的竞争剂是对于单个相同识别位点而有意引入样品中的，其可以由受体或抗体构成。在ELISA(酶联免疫吸附测定)或RIA(放射免疫测定)/RRA(放射受体测定)类型的形式中，分析所需的时间是2-6小时的级别。这些方法中的一些，特别是实验室的RRA方法，使得能够同时检测不同类型的数种化合物。然而，在该情形中，该方法不允许鉴定已提供了阳性应答的化合物所属的类型。

-最近以来，允许分离和鉴定所研究的化合物的更复杂的物理-化学方法就其来说主要是其中将色谱法分离系统与质谱法检测系统相偶联的方法(GC/MS或LC/MS)。这些方法需要对于待鉴定的每种不同化合物来调整特定的方案。有时候单种化合物或相同类型的一部分化合物可以同时进行分析，有时候相同类型的所有化合物可以得到检测，但这对不同类型的化合物从来是不可能的。事实上，色谱法分离的原理是给定化合物的物理-化学特性的表征，这些物理-化学特性通常在一种类型与另一种类型之间是不同的。在操作者不知道待鉴定的化合物的类型的情形中，必须考虑与存在的化合物类型一样多的方法。

近些年来，还开发了快得多的方法。这些称为“RAPID TESTS”的方法用于对大量的样品进行快速检出。通常，这些方法利用所研究的化合物根据竞争原理相对于生物分子的识别。为了使分析快捷而简便，这些类型的测试借助于具有侧流的膜装置(Tetrasensor^TM、SNAP^、Beta-STA^TM、ROSA)进行工作。这些测试根据各种不同类型的抗生物素而变化，但至今已知的这些产品没有一种允许在单次操作中检测属于不同类型的化合物。

如果设想且规定在农业食品领域进行初级检出分析是合理的，那么所涉及的领域将需要能够优选鉴定最大数目的可疑化合物的尽可能完全的分析。这是因为，对单个样品进行单次多重检测与必须对每种特定化合物进行一次特定的检测相比更实用且经济。这种实践在时间、样品管理和花费方面是繁重的。这制约了对食品的良好管理和有效检查。

因此，在这个阶段，这种校查在效率方面受到巨大的限制，特征在于缺乏多分析物测试，所述多分析物测试允许在单次操作中并且例如在少于10分钟内检测数种分析物类型的所有化合物。