[发明专利]用阳离子表面活性剂纯化蛋白质的方法

权利要求书

1.一种用于纯化靶蛋白的方法，该方法包括以下步骤：

a.获得包含增溶靶蛋白、一种或多种增溶污染蛋白和碱性缓冲液的混合物 的溶液，其中所述靶蛋白在碱性pH下带正电荷且等电点大于7，所述一种或多 种污染蛋白具有聚阴离子电荷；

b.使所述包含增溶靶蛋白、一种或多种增溶污染蛋白和碱性缓冲液的混合 物的溶液与一种或多种阳离子表面活性剂接触，所述阳离子表面活性剂的量有 效地使一种或多种污染蛋白优先沉淀出来，其中所述一种或多种阳离子表面活 性剂是选自通式QN⁺的季铵化合物、通式RNH₃⁺的烷烃链伯铵化合物及其盐的 两亲性铵化合物，因此，保留在溶液中由靶蛋白所代表的蛋白质的比例增大； 和

c.回收增溶靶蛋白。

2.权利要求1的方法，其中所述两亲性铵化合物选自十六烷基吡啶盐、 硬脂酰胺-甲基吡啶盐、月桂基吡啶盐、十六烷基喹啉盐、月桂基氨基丙 酸甲酯盐、月桂基氨基丙酸金属盐、月桂基二甲基甜菜碱、硬脂基二甲基甜菜 碱、月桂基二羟乙基甜菜碱和苄索铵盐。

3.权利要求2的方法，其中所述两亲性铵化合物选自氯化十六烷基吡啶、 醋酸地喹铵、氯化十六烷基三甲基铵、混合氯化正烷基二甲基苄基铵、氯化N,N- 二甲基-N-[2-[2-[4-(1,1,3,3,-四甲基丁基)-苯氧基]乙氧基]乙基]苯甲铵、氯化烷基- 二甲基苄基-铵和氯化二氯-苄基二甲基-烷基铵、溴化十四烷基三甲基铵、溴化 十二烷基三甲基铵、溴化十六烷基三甲基铵、月桂基二甲基甜菜碱、硬脂基二 甲基甜菜碱和月桂基二羟乙基甜菜碱。

4.权利要求2的方法，其中所述两亲性铵化合物是十六烷基吡啶盐。

5.权利要求4的方法，其中所述十六烷基吡啶盐是卤化盐。

6.权利要求5的方法，其中所述十六烷基吡啶卤化盐是氯化十六烷基吡 啶。

7.权利要求6的方法，其中所述两亲性铵化合物具有至少1条含6-20个碳 原子的脂族链。

8.权利要求7的方法，其中所述脂族链具有8-18个碳原子。

9.权利要求1的方法，其中所述溶液还包含一种或多种细胞组分。

10.权利要求9的方法，其中所述一种或多种细胞组分来源于微生物。

11.权利要求10的方法，其中所述微生物是细菌。

12.权利要求11的方法，其中所述细菌是大肠杆菌。

13.权利要求9的方法，其中所述一种或多种细胞组分是一种或多种蛋白 质。

14.权利要求1的方法，其中所述靶蛋白是重组蛋白。

15.权利要求14的方法，其中所述重组蛋白是酶。

16.权利要求14的方法，其中所述靶蛋白选自抗体、尿酸氧化酶、因子X 抑制剂、酸性脱氧核糖核酸酶II、弹性蛋白酶、溶菌酶、木瓜蛋白酶、过氧化物 酶、胰核糖核酸酶、胰蛋白酶原、胰蛋白酶、细胞色素c、半环扁尾蛇毒素、金 黄色葡萄球菌肠毒素C1、干扰素和单胺氧化酶A。

17.权利要求16的方法，其中所述靶蛋白是尿酸氧化酶。

18.权利要求17的方法，其中所述尿酸氧化酶是哺乳动物尿酸氧化酶。

19.权利要求18的方法，其中所述哺乳动物尿酸氧化酶是猪尿酸氧化酶。

20.权利要求14的方法，其中所述靶蛋白是抗体。

21.权利要求20的方法，其中所述抗体是单链抗体。

22.权利要求14的方法，其中所述靶蛋白是干扰素。

23.权利要求22的方法，其中所述干扰素是干扰素β。

24.权利要求1的方法，其中加入所述一种或多种阳离子表面活性剂至浓度 为0.001%-5.0%。