[发明专利]内毒素检测法

说明书

技术领域

本发明涉及内毒素检测法。

背景技术

已知注射剂中如果混有发热性物质(pyrogen)，则将出现发热、寒战等症状。为了防止发热性物质的混入，以往已知通过发热性物质检测法来检测发热性物质，并使用于注射剂的制造工序、质量管理等中，但是该检测法要花费很长时间和很多人工，非常麻烦(参考非专利文献1)。

已知发热性物质主要是作为革兰氏阴性菌的细胞壁构成成分的内毒素。以检测或定量来自革兰氏阴性菌的内毒素等为目的，已知有以由内毒素造成马蹄型蟹(美洲鲎(Limulus  polyphemus)、中国鲎(Tachypleus tridentatus)等)的血细胞提取成分(溶胞产物)的凝固为基本原理的内毒素检测法(参考非专利文献2)，近年在发热性物质的检测中，多采用内毒素检测法来代替发热性物质检测法。

【非专利文献1】第14改正日本药局方解说书(第14次修订日本药典说明书)广川书店2001B-493

【非专利文献2】第14改正日本药局方解说书(第14次修订日本药典说明书)广川书店2001B-63

发明的揭示

本发明对用非专利文献2记载的方法不能正确检测、定量来自革兰氏阴性菌的内毒素的样品，提供了可以检测样品中的内毒素的方法。

本发明者经过认真的研究，结果发现在使用了溶胞产物试剂的内毒素检测中，通过在白蛋白及/或球蛋白存在下，向样品添加溶胞产物试剂实施检测可以解决上述课题，从而完成了本发明。

即，本发明涉及新的内毒素检测法以及内毒素浓度不到标准值的注射剂的制造方法，涉及以下的发明。

(1)内毒素检测法，其特征在于，于白蛋白及/或球蛋白的存在下，向喜树碱衍生物、替米哌隆或紫杉烷衍生物的溶液或分散液中添加溶胞产物试剂。

(2)如上述(1)所述的检测法，其中，白蛋白及/或球蛋白为人血清白蛋白。

(3)如上述(1)或(2)所述的检测法，其中，喜树碱衍生物为盐酸伊立替康。

(4)内毒素浓度不到标准值的含有药效成分的注射剂的制造方法，其中，包括于白蛋白及/或球蛋白的存在下，向所述药效成分的溶液或分散液中添加溶胞产物试剂来评价有无内毒素的筛选工序。

(5)内毒素浓度不到标准值的含有喜树碱衍生物、替米哌隆或紫杉烷衍生物的注射剂的制造方法，其中，包括于白蛋白及/或球蛋白的存在下，向喜树碱衍生物、替米哌隆或紫杉烷衍生物的溶液或分散液中添加溶胞产物试剂来评价有无内毒素的筛选工序。

(6)如上述(4)或(5)所述的制造方法，其中，白蛋白及/或球蛋白为人血清白蛋白。

(7)如上述(5)或(6)所述的制造方法，其中，喜树碱衍生物为盐酸伊立替康。

由后述实施例可知，通过本发明的检测法，对用通常的检测法不能正确检测、定量的来自革兰氏阴性菌的内毒素的样品也可以检测、定量样品中的内毒素。因此，可以不经复杂的发热性物质检测法而进行注射剂的制造工序、质量管理，另外，可以提供内毒素浓度不到标准值的注射剂的制造方法。此外，由于可以不利用使用家兔的发热性物质检测法来检测发热性物质等，因此从动物保护的观点来看也是优选的。

实施发明的最佳实施方式

本发明中，白蛋白及/或球蛋白的存在下，使样品(药效成分的溶液或分散液)与溶胞产物试剂反应，检测、定量样品中的内毒素与溶胞产物试剂的反应。

本发明中涉及的白蛋白及/或球蛋白可例举如将血浆或血清精制或部分精制而得的产物或含有白蛋白及/或球蛋白作为成分的物质。该白蛋白和球蛋白优选人血清蛋白。作为以白蛋白及/或球蛋白为含有成分的物质，可例举如科恩分级(COHN’s  fractions)或电泳而得的白蛋白级分或球蛋白级分、市售的新鲜冷冻人血浆(例如，日本红十字会社)、加热人血浆蛋白(例如，日本制药株式会社等)、人血清白蛋白(例如，日本红十字会社、三菱ウェルフア一マ株式会社、バクスタ一株式会社等)、人免疫球蛋白(例如，日本红十字株式会社、三菱ウェルフア一マ株式会社、バクスタ一株式会社等)等。本发明从内毒素的检测灵敏度的观点来看，优选人血清白蛋白。